1、近二三十年，隨著世界經(jīng)濟和環(huán)境的迅猛變化，全球傳染病的發(fā)生與流行也發(fā)生了巨大的變化，一些曾被控制的傳染病死灰復(fù)燃，而一些新出現(xiàn)的傳染病又肆虐人類，生物恐怖襲擊等突發(fā)公共衛(wèi)生事件更威脅著國家和人民的安全。出入境檢驗檢疫機關(guān)肩負著防止傳染病在國境口岸傳入傳出的重任，增強傳染病的快速診斷能力是當(dāng)前口岸衛(wèi)生檢疫工作的迫切需要。盡管有些傳染病目前在我國的發(fā)生率不是很高，但是在南方地區(qū)特殊的氣候環(huán)境、各類人畜共患傳染病的自然儲存宿主和傳播媒介廣泛存

2、在，成為某些傳染病發(fā)生和流行的潛在因素，加之邊境線長的特殊的地理位置作為有利條件，更使得我國要防止傳染病經(jīng)由國境口岸傳入傳出，不斷增強傳染病防控能力建設(shè)更加必要和迫切。 流行性乙型腦炎(epidemictypeBencephalitis)，又稱日本腦炎(Japaneseencephalitis)，簡稱乙腦，是由乙腦病毒(Japaneseencephalitisvirus，JEV)引起的一種人畜共患的自然疫源性疾病。乙腦嚴重威脅人

3、類(特別是兒童)健康。多數(shù)人感染后不發(fā)病，但是一旦發(fā)病后，病死率可達30％，存活者約20％～40％留有神經(jīng)麻痹和心理改變等嚴重后遺癥。 20世紀前半葉，乙腦主要在亞洲大陸的日本、朝鮮和中國等溫帶地區(qū)流行，日本和韓國由于采取大規(guī)模人群接種鼠腦滅活純化疫苗，目前發(fā)病人數(shù)已下降至每年5例以下。但1969年以后泰國、緬甸、越南、老撾、柬埔寨、馬來西亞、印度尼西亞、印度、尼泊爾開始有較多的病例發(fā)生或流行。20世紀90年代以后乙腦流行區(qū)域有

4、進一步擴大的趨勢。就我國而言，除西藏、新疆、青海外，全國其他省區(qū)均為乙腦流行。在1957年、1966年和1971年先后曾發(fā)生三次乙腦爆發(fā)流行，后兩次發(fā)病人數(shù)分別高達15萬和17萬多，發(fā)病率達20/10萬以上。自1976年大量使用乙腦疫苗預(yù)防接種以來，病例逐年下降，沒有發(fā)生較大流行。2004年全國乙腦的報告發(fā)病例數(shù)為5422例，死亡200例；2005年在全國仍然存在不同程度的爆發(fā)流行。 人禽流行性感冒(HumanAvianInfl

5、uenza，簡稱人禽流感)是人接觸禽流感病毒污染的排泄物或分泌物而感染并出現(xiàn)以呼吸道感染、黏膜充血等癥狀為主要表現(xiàn)的人禽共患病，部分感染高致病性禽流感毒株(如H5N1)的患者可出現(xiàn)呼吸衰竭和多器官損害，病死率較高。禽流感病毒目前可分為16個H亞型(H1～H16)和10個N亞型(N1～N10)。到目前為止，所有高致病性流感的爆發(fā)流行都是由甲型流感H5和H7亞型引起的。近來我國香港和內(nèi)地發(fā)現(xiàn)，禽H5N1和H9N2亞型流感病毒能直接感染人。最

6、近研究顯示，禽H9N2毒株具有人流感病毒類似的受體特異性。1998年廣東省首次從人咽拭子中分離到H9N2禽流感病毒，也是全世界首次從人咽拭子中分離到H9N2禽流感病毒。同時H9N2亞型毒株具有廣泛的宿主范圍，能感染豬，在未來有可能引起人間流感大流行。因此，H9N2流感病毒已越來越引起人們的重視。 血清流行病學(xué)是流行病學(xué)的一個重要分支，通過測定人群血清中各種成分的出現(xiàn)，并分析其分布規(guī)律，研究疾病在人群中存在的情況，為疾病的預(yù)防提供

7、依據(jù)，并可為病因研究提供線索；血清學(xué)檢測是疾病監(jiān)測的主要手段之一。通過查明一個地區(qū)人群對某種疾病免疫水平及其動態(tài)變化，可以預(yù)測疾病發(fā)生的可能性和發(fā)生強度；而近年來發(fā)展起來的分子流行病學(xué)則是充分應(yīng)用不斷豐富的分子生物學(xué)理論和技術(shù)，從分子及基因水平闡明病原體的特征、進化變異規(guī)律及其群體分布等，為傳染病的控制和預(yù)防提供科學(xué)依據(jù)，從而成為傳染病監(jiān)測新的重要手段。 本研究旨在通過對乙腦宿主動物(豬群)及其密切接觸者進行乙腦血清抗體水平的調(diào)

8、查以及對蚊媒介攜帶病毒的監(jiān)測；通過對家禽密切接觸者人禽流感病毒血清抗體水平和病毒攜帶的流行病學(xué)調(diào)查，探索乙腦和人禽流感的發(fā)生和傳播規(guī)律，為更加有效地加強本地區(qū)人群禽流感、乙腦及其他傳染病監(jiān)測和防控工作提供科學(xué)依據(jù)。 方法： 1.出入境人員、豬群及其密切接觸者進行血清乙腦抗體檢測。密切接觸者的血清樣本采集自4個養(yǎng)豬場從業(yè)人員血清132份；本地區(qū)發(fā)熱病人血清89份；豬群則選擇幼豬(30天內(nèi))、中豬(3～4個月)，大豬(6個月

9、左右，出欄前)為檢測對象，共1172只； 2.對捕獲的1504只蚊(養(yǎng)豬場：742只；各口岸：542只；其他：220只)研究媒介蚊的種群構(gòu)成，尤其是三帶喙庫蚊分布及其蚊體內(nèi)病毒的帶毒情況； 3.病毒的分離、基因擴增與病毒型別鑒定和序列分析：伊蚊標本經(jīng)研磨后制成懸液，直接提取病毒的RNA，或接種C6/36細胞培養(yǎng)后再提取RNA；進行RT-PCR；病毒的鑒定和序列分析：樣本DNA，克隆到質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至大腸桿菌，進行基因序列測定

10、； 4.檢測注冊禽類養(yǎng)殖場、屠宰場等員工、本單位有接觸禽類動物的工作人員血清277份以及作為實驗室對照用的非接觸禽類動物的出入境人員血清270份中禽流感的抗體，以了解其抗體水平和以往的接觸感染情況；研究方法包括：血凝試驗和血凝抑制試驗、陽性樣本的反轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈式擴增(RT-PCR)； 5.有疑問禽流感病例時，采集其咽喉拭子或含漱液，再進行禽流感病毒核糖核酸的反轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈式擴增(RT-PCR)，血凝試驗/血凝抑制試驗

11、陽性以及RT-PCR核酸檢測陽性的樣本送往國家流感中心確認。 結(jié)果： 1.在1172份豬血清樣本中，乙腦IgG抗體陽性樣本數(shù)為450份，陽性率為450/1172(38.4％)，而221份人群血清中，乙腦IgM抗體的實驗室檢測為陰性0/222(0％)，兩者之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=125.87p=0.000)。 2.在742只養(yǎng)豬場捕獲的蚊樣本中：三帶喙庫蚊265只占35.71％，致倦庫蚊為34.50％，海濱

12、庫蚊為19.68％，中華按蚊為6.60％，數(shù)量最少的是常型曼蚊(0.14％)；各口岸捕獲的542只蚊樣本中：白紋伊蚊占82.47％，致倦庫蚊為16.25％，海濱庫蚊為0.37％，巨型阿蚊為0.37％，數(shù)量最少的是三帶喙庫蚊和常型曼蚊(各占0.18％)。 3.蚊液RT-PCR結(jié)果的3個陽性標本，擴增片段在600～700bp之間，不符合理論設(shè)計的835bp，經(jīng)測序表明其不屬于黃病毒類。細胞培養(yǎng)液的RT-PCR產(chǎn)物，克隆后測序，證實擴

13、增出的片段是835bp。 4.蚊液RT-PCR結(jié)果的3個陽性標本都是致倦庫蚊的標本，而且都來源于養(yǎng)豬場；細胞培養(yǎng)液7個陽性結(jié)果分別為：3例致倦庫蚊(2例來源于養(yǎng)豬場，另1例來源于口岸)、3例白紋伊蚊(來源于口岸)和1例海濱庫蚊(來源于養(yǎng)豬場)。 5.熒光定量PCR檢測乙腦、登革熱和西尼羅病毒，結(jié)果都為陰性。 6.養(yǎng)殖場和正常人群中H9、H5亞型甲型流感病毒血清學(xué)抗體調(diào)查顯示：養(yǎng)殖場從業(yè)人員277份血清中，H5亞型

14、抗體陽性1份，陽性率為0.36％，H9亞型抗體6份，H9抗體陽性率為2.17％；正常出入境人員血清270份，H9亞型抗體陽性8份，陽性率為2.96％，未見H5亞型抗體存在。 7.H5和H9亞型病毒血清水平：養(yǎng)殖場從業(yè)人員277份血清效價中，H5亞型抗體血清效價情況：1∶10有4份，占1.44％；1∶20有1份，占0.36％；H9亞型抗體血清效價情況：1∶20和1∶40各有3份；1∶20和1∶40各有3份。正常出入境人員270份H

15、9亞型血清抗體效價情況：1∶20有2份，占0.74％，1∶40沒有，1∶80有2份，占0.74％，1∶160有4份，占1.48％。禽類養(yǎng)殖場人群和正常出入境人群H9亞型抗體滴度(≥1∶80)陽性率比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 8.RT-PCR擴增：H5和H9陽性血清提取RNA后，再行逆轉(zhuǎn)錄和RT-PCR擴增，結(jié)果沒有擴增出預(yù)期的核酸帶。 結(jié)論： 1.養(yǎng)豬場蚊蟲以三帶喙庫蚊和致倦庫蚊為主，致病媒介蚊體以致

16、倦庫蚊為主，其次為海濱庫蚊；而口岸則以白紋伊蚊和致倦庫蚊為主，致病媒介蚊體以白紋伊蚊為主，其次為致倦庫蚊。 2.養(yǎng)殖場豬群存在著乙腦病毒的隱性感染或曾經(jīng)感染過，豬群密切接觸者和發(fā)熱病人則無隱性感染。豬群可能是本地區(qū)流行性乙型腦炎傳播的主要環(huán)節(jié)。 3.蟲媒病毒主要是黃病毒類，也有可能存在其它的病毒，RT-PCR方法未能檢出乙腦病毒、登革熱和西尼羅病毒。該地是乙腦和登革熱低發(fā)病率區(qū)。 4.本地區(qū)養(yǎng)殖場人群和出入境人群