1、研究背景及意義：成熟脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞及成骨細(xì)胞可以由共同的間充質(zhì)干細(xì)胞分化而來(lái)。這三個(gè)方向的分化進(jìn)程相互聯(lián)系、相互制約，在體內(nèi)呈現(xiàn)出動(dòng)態(tài)的平衡關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)有些轉(zhuǎn)錄因子處于不同方向分化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的交叉點(diǎn)，其表達(dá)水平或與體內(nèi)各組織分化平衡狀態(tài)的維持密切相關(guān)。KLF轉(zhuǎn)錄因子家族(Kr(u)ppel-like factor family)成員KLF2和KLF15在脂肪組織中均有表達(dá)，在成脂分化不同階段發(fā)揮重要作用。此外，KLF2還表達(dá)于肌肉、骨

2、髓等部位，KLF15還表達(dá)于骨骼肌及骨組織，但它們?cè)诠趋兰“l(fā)育、骨組織形成中是否發(fā)揮重要作用還未見(jiàn)報(bào)道。目前關(guān)于KLF家族成員與細(xì)胞分化的相關(guān)數(shù)據(jù)多來(lái)自于具有單向分化潛能的細(xì)胞系，不利于將不同方向分化機(jī)制聯(lián)系并統(tǒng)一起來(lái)，而利用多向分化潛能的間充質(zhì)干細(xì)胞可以同步建立不同方向的體外分化模型，對(duì)KLF2和KLF15在各分化過(guò)程中的表達(dá)進(jìn)行分析，為進(jìn)一步研究KLF2和KLF15在成肌、成骨分化過(guò)程中的作用機(jī)制以及這三種分化過(guò)程的聯(lián)系提供依據(jù)。<

3、br>　　 目的：研究轉(zhuǎn)錄因子KLF2和KLF15在入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)成脂、成肌、成骨分化過(guò)程中的表達(dá)水平及變化趨勢(shì)，并通過(guò)與成脂相關(guān)因子PPAR(γ)、GLUT4、成骨相關(guān)因子RUNX2及成肌相關(guān)因子MYOD的表達(dá)模式進(jìn)行比較，探討這些因子之間可能存在的聯(lián)系。
　　 方法：采用密度梯度離心法分離人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，將貼壁細(xì)胞傳代

4、培養(yǎng)，采用第四代細(xì)胞分別向成骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞與脂肪細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)，應(yīng)用茜素紅、油紅O染色和免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)誘導(dǎo)分化的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(realtimePCR)檢測(cè)在誘導(dǎo)分化不同時(shí)間點(diǎn)KLF2、KLF15、PPAR(γ)、GLUT4、myoD和RUNX2的mRNA表達(dá)水平，通過(guò)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)在誘導(dǎo)分化不同時(shí)間點(diǎn)KLF2和KLF15蛋白的定位和豐度。
　　 結(jié)果：在特定誘導(dǎo)劑作用下hBMSCs

5、可分化為脂肪細(xì)胞、成肌細(xì)胞與成骨細(xì)胞，經(jīng)鑒定均為陽(yáng)性。
　　 熒光實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示KLF2在hBMSCs成脂、成肌分化早期表達(dá)水平均呈下降趨勢(shì)，在成骨分化中也有下降趨勢(shì)，早期不明顯；KLF15在成脂分化中期及成肌、成骨分化早期mRNA表達(dá)水平均表現(xiàn)為上升趨勢(shì)。免疫熒光染色支持定量PCR結(jié)果。
　　 定向誘導(dǎo)hBMSCs成脂、成肌、成骨過(guò)程中分別檢測(cè)到相關(guān)標(biāo)志基因的上調(diào)。
　　 結(jié)論：在hBMSCs成脂、成肌