1、目的：探討自身免疫性POF的免疫學(xué)診斷方法；建立自身免疫性POF動(dòng)物模型，采用糖皮質(zhì)激素和雄激素治療自身免疫性POF模型小鼠為臨床治療提供理論依據(jù)。 方法：分三個(gè)部分進(jìn)行。 第一部分自身免疫性卵巢早衰的診斷的研究：52例卵巢早衰并不孕癥患者為研究組，20例其他原因不孕癥患者為對(duì)照組，分別檢查血清抗核抗體，抗卵巢組織抗體，抗心磷脂抗體，抗甲狀腺微粒體抗體，抗雙鏈DNA抗體，免疫球蛋白IgG，IgA，IgM，IgE，補(bǔ)體C3

2、，C4含量及抗透明帶抗體濃度，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 第二部分實(shí)驗(yàn)性自身免疫性卵巢早衰小鼠模型的建立：取近交系雌性小鼠（C57BL/6J），鼠齡7-9周130只，分別為模型組120只、空白對(duì)照組10只，各組小鼠均于雙后腳掌掌心處進(jìn)行皮下注射。模型組注射CFA-pZP3混合液0.1毫升，其中包含CFA：0.05毫升，pZP3：72.225ug；空白對(duì)照組注射三蒸水0.1毫升。建模觀察指標(biāo)為④各組小鼠陰道脫落細(xì)胞涂片觀察性周期的改變；②

3、采用ELISA檢測(cè)小鼠外周血清中抗透明帶抗體的濃度；③光學(xué)顯微鏡檢查各組小鼠卵巢組織學(xué)改變：以生長(zhǎng)卵泡所占比例表示卵巢萎縮受損程度；④免疫組化法檢測(cè)卵巢組織中CD45陽性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度判斷其自身免疫性卵巢炎嚴(yán)重程度。模型組隨機(jī)選擇10只小鼠與空白組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較和分析，評(píng)估建模是否成功。 第三部分糖皮質(zhì)激素和雄激素治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性卵巢早衰小鼠的研究：以出現(xiàn)明顯性周期紊亂為標(biāo)準(zhǔn)，選擇建模成功的自身免疫性POF小鼠80只，隨機(jī)分

4、為4組：每組20只，模型對(duì)照組同期每日腹腔注射三蒸水0.05ml，其余三組分別給以糖皮質(zhì)激素、雄激素、糖皮質(zhì)激素加雄激素聯(lián)合治療三個(gè)性周期，以上述建模指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)作為療效觀察指標(biāo)，判斷其治療效果，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 第一部分：研究組ANA，AOAb，ds-DNA，A-TG陽性率及抗透明帶抗體濃度分別為38.5％，40.4％，35.5％，44.2％和110.42±10.38pg/ml，均顯著性高于對(duì)照組，P<0.0

5、5；研究組ACA、免疫球蛋白IgM、補(bǔ)體C3異常率較高，分別28.8％、23.1％和25％，但與對(duì)照組無顯著性差別，P>0.05；研究組免疫球蛋白IgG，IgA，IgE，補(bǔ)體C4異常率較低分別為5.8％，1.9％，1.9％，3.8％，與對(duì)照組無顯著性差別，P>0.05。 第二部分：模型組小鼠80％表現(xiàn)為性周期紊亂，血清抗透明帶抗體平均濃度高達(dá)17.55±3.52（ng/ml），生長(zhǎng)卵泡比例低達(dá)22.44±5.88（％），出現(xiàn)自身

6、免疫性卵巢炎，即CD45陽性細(xì)胞浸潤(rùn)的小鼠比例為90％，上述指標(biāo)均較空白組有顯著性差異，P<0.01。 第三部分：①性周期正常者糖皮質(zhì)激素組60％，雄激素組70％，聯(lián)合治療組65％，模型對(duì)照組僅10％。各治療組與模型對(duì)照組均存在顯著差異，P<0.01。但三個(gè)治療組進(jìn)行兩組間比較，均無顯著差異，P>0.05。②皮質(zhì)激素組、雄激素組及聯(lián)合治療組小鼠血清抗透明帶抗體平均濃度分別為（ng/ml）21.18±6.72，16.12±4.64

7、和18.32±5.28，與模型對(duì)照組（32.61±8.77）比較均存在顯著差異，P<0.01。糖皮質(zhì)激素組明顯高于與雄激素組，P<0.01。糖皮質(zhì)激素組與聯(lián)合治療組、雄激素組與聯(lián)合治療組之間均不存在顯著差異，P>0.05。③糖皮質(zhì)激素組、雄激素組及聯(lián)合治療組各組小鼠組織學(xué)檢查生長(zhǎng)卵泡比例分別為（％）36.8±8.00，37.5±6.06和30.71±4.36，與模型對(duì)照組（25.72±5.31）比較均存在顯著差異，P<0.01。糖皮質(zhì)激

8、素組與雄激素組無顯著差異，P>0.05；糖皮質(zhì)激素組與聯(lián)合組、雄激素組與聯(lián)合治療組之間均存在顯著差異，P<0.01。④各組出現(xiàn)自身免疫性卵巢炎，即CD45陽性細(xì)胞浸潤(rùn)的小鼠比例分別為糖皮質(zhì)激素組25％，雄激素組30％，聯(lián)合治療組50％，均與模型對(duì)照組90％存在顯著差異，P<0.01。三個(gè)治療組進(jìn)行兩組間比較，均無顯著差異，P>0.05。 結(jié)論： 1.卵巢早衰患者存在多種自身免疫性抗體，ANA，AOAb，ds-DNA，A-

9、TG，抗透明帶抗體等檢測(cè)對(duì)診斷自身免疫性卵巢早衰有臨床實(shí)際意義。 2.通過給小鼠皮下免疫注射小鼠透明帶多肽片段，成功地建立了小鼠的自身免疫性卵巢早衰的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，為進(jìn)行卵巢早衰的診斷學(xué)及治療學(xué)方面的研究提供了前提條件。 3.糖皮質(zhì)激素和雄激素均能顯著改善實(shí)驗(yàn)性自身免疫性卵巢早衰小鼠的臨床癥狀及免疫反應(yīng)指標(biāo)。且二者療效無顯著性差異。 4.糖皮質(zhì)激素和雄激素聯(lián)合治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性卵巢早衰小鼠的效果并不優(yōu)于上述兩者