1、本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，在小麥籽粒灌漿期間wheat starch regulator1（TaRSR1）轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)量與11個(gè)淀粉合成相關(guān)酶基因的表達(dá)量呈顯著負(fù)相關(guān)，推測(cè)TaRSR1可能負(fù)向調(diào)控這些基因的表達(dá)從而參與了淀粉的合成。為了驗(yàn)證上述推測(cè)，本研究運(yùn)用cDNA末端快速擴(kuò)增法(RACE)克隆得到TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子的cDNA序列，選用3個(gè)拷貝中高度同源的一段序列(284bp)構(gòu)建了此轉(zhuǎn)錄因子的沉默表達(dá)載體，進(jìn)而在田間條件下利用大麥條

2、紋花葉病病毒誘導(dǎo)的基因沉默(barley stripe mosaic virus-virus induced gene-silencing，BSMV-VIGS)技術(shù)，獲得了TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子沉默的小麥植株;進(jìn)一步測(cè)定了灌漿期間沉默植株籽粒內(nèi)TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子和26個(gè)淀粉合成相關(guān)酶基因的轉(zhuǎn)錄水平，及成熟期沉默植株籽粒性狀，以進(jìn)一步探究TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控小麥淀粉合成的分子機(jī)理。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)運(yùn)用RACE技術(shù)克

3、隆出TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子5'端序列，序列拼接獲得TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子的全長(zhǎng)cDNA序列，其長(zhǎng)2262bp，開放閱讀框(ORF)為1485bp，編碼494個(gè)氨基酸。TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子基因組序列包括8個(gè)外顯子和7個(gè)內(nèi)含子。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative real-time，RT-qPCR)進(jìn)行TaRSR1轉(zhuǎn)錄因子3個(gè)拷貝表達(dá)量分析，結(jié)果表明D拷貝上表達(dá)量最高。
　　(2)選擇上述3個(gè)拷貝中同源性非常高的一段序列(284

4、bp)，構(gòu)建了BSMV-TaRSR1病毒沉默載體，并在田間小麥抽穗期接種于穗部，獲得了BSMV-TaRSR1沉默的小麥植株。同時(shí)將BSMV-GFP(reen fluorescent protein)沉默載體也接種于小麥穗部，此沉默植株作為對(duì)照。結(jié)果表明，BSMV-TaRSR1沉默植株成熟籽粒淀粉含量、千粒重、粒長(zhǎng)和粒寬均顯著增加。在花后20d、27d和31d的測(cè)定結(jié)果表明，BSMV-TaRSR1沉默植株中26個(gè)淀粉合成相關(guān)酶基因中，Ta