1、腎細(xì)胞癌(RCC)是泌尿系常見惡性腫瘤，其發(fā)病率占全身惡性腫瘤的3％，全世界的發(fā)病率每年遞增2％，死亡人數(shù)逐年上升。腎癌的主要治療方法是外科手術(shù)，化療、放療、激素治療均不敏感，尤其是晚期腎癌的治療效果不容樂觀。因此，如何實現(xiàn)腎細(xì)胞癌的早期診斷、早期治療成為我們在臨床工作中需要迫切解決的問題。抑制性消減雜交(SSH)是以消減雜交為基礎(chǔ)結(jié)合抑制性PCR建立起來的分離克隆差異表達(dá)基因的方法，是近年發(fā)展起來的篩選、克隆差異表達(dá)基因的一種有效手段

2、。 我們采用抑制性消減雜交(SSH)技術(shù)構(gòu)建高侵襲性腎癌細(xì)胞和低侵襲性腎癌細(xì)胞差異表達(dá)的cDNA消減文庫，初步篩選并克隆腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，為建立一套檢測腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移的生物學(xué)標(biāo)志和治療的新靶點奠定了基礎(chǔ)。 目的：構(gòu)建高侵襲性腎癌細(xì)胞和低侵襲性腎癌細(xì)胞差異表達(dá)基因的cDNA消減文庫，篩選并克隆腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因； 　　方法：以高侵襲性腎癌細(xì)胞和低侵襲性腎癌細(xì)胞為研究對象，進(jìn)行抑制性消減雜交分析：分別提取細(xì)胞To

3、tal RNA，合成雙鏈cDNA，經(jīng)RsaI酶切后將高侵襲性腎癌細(xì)胞cDNA分為兩組并加上不同的接頭，再與過量低侵襲性腎癌細(xì)胞cDNA進(jìn)行兩次消減雜交及兩次抑制性PCR，將PCR產(chǎn)物與T/A載體連接并轉(zhuǎn)化大腸桿菌構(gòu)建構(gòu)建cDNA消減文庫，以菌液PCR的方法檢測隨機(jī)挑選的陽性克隆，送檢測序，利用BLAST軟件進(jìn)行同源性分析，半定量RT-PCR方法檢測腎細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因在腎癌原發(fā)組織和轉(zhuǎn)移組織中的差異表達(dá)； 結(jié)果：成功構(gòu)建高侵襲性