1、目的:線粒體不僅是細(xì)胞內(nèi)的能量供應(yīng)單元，而且還參與多種細(xì)胞活動(dòng)，包括蛋白質(zhì)合成、細(xì)胞復(fù)制、細(xì)胞凋亡等。線粒體含有自己的DNA系統(tǒng)，可以進(jìn)行獨(dú)立于核DNA之外的復(fù)制以及轉(zhuǎn)錄參與電子轉(zhuǎn)遞過程的23種酶。和正常細(xì)胞不同的是，腫瘤細(xì)胞內(nèi)的線粒體功能和結(jié)構(gòu)發(fā)生了很多改變，其中包括線粒體DNA突變，電子傳遞鏈的中斷，線粒體膜電位的變化以及以線粒體為中心的細(xì)胞凋亡過程的抑制等。同時(shí)，腫瘤細(xì)胞采用有氧糖酵解過程作為能量供應(yīng)主要來源也是腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞

2、的主要差別之一，并且有氧糖酵解過程中產(chǎn)生的能量隨著腫瘤級(jí)別的增加而增加。為了探討膠質(zhì)瘤治療的新途經(jīng)，探索可以活化正常細(xì)胞線粒體功能、增加氧化磷酸的藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用，我們進(jìn)行了本次研究。 方法: 1．提取U251細(xì)胞中的線粒體DNA，設(shè)計(jì)ATP6ase和ND6基因相應(yīng)的引物，對(duì)ATP6ase及ND6基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。將測(cè)序結(jié)果和人類正常線粒體基因相比對(duì)，找出差別。 2．使用U251、C6兩

3、種膠質(zhì)瘤細(xì)胞系。觀察終濃度為20、30、40μ M的Idebenone對(duì)其生長(zhǎng)曲線的影響。通過檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)羅丹明和JC-1的熒光強(qiáng)度，觀察不同濃度的Idebenone對(duì)線粒體膜電位的影響；通過檢測(cè)DCFH-DA熒光強(qiáng)度，觀察Idebenone對(duì)細(xì)胞內(nèi)ROS生成和通過免疫組化方法檢測(cè)Idebenone對(duì)PRDX3表達(dá)的影響；通過檢測(cè)細(xì)胞和線粒體提取液中螢火蟲熒光素酶強(qiáng)度，觀察Idebenone對(duì)兩者內(nèi)ATP的影響。 結(jié)果:

4、1．Blast比對(duì)顯示U251 ATP6ase基因較正?；蛳啾却嬖贏8660G改變，ND6較正常沒有明顯變化。 2．我們發(fā)現(xiàn)Idebenone可以抑制兩種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，且這種抑制作用隨著藥物濃度的增加而明顯。Idebenone可以降低線粒體膜電位，但是這種作用有一定的時(shí)間期限。Idebenone增加細(xì)胞內(nèi)ROS的生成，且ROS的濃度隨著Ideenone的濃度增加而增加；Idebenone可以降低細(xì)胞內(nèi)PRDX3的表達(dá)。Ide

5、benone可以減少細(xì)胞內(nèi)ATP濃度，同時(shí)這種作用隨著藥物濃度增加而增加；但是對(duì)兩種細(xì)胞氧化磷酸化途經(jīng)的ATP生成沒有明顯影響。 結(jié)論: 1．L3251細(xì)胞中ATP6ase基因存在點(diǎn)突變，且突變位點(diǎn)具有罕見多態(tài)性，提示A8860G可能與膠質(zhì)瘤有關(guān)；同時(shí)分析顯示出現(xiàn)氨基酸缺失，提示ATP6ase功能可能出現(xiàn)障礙，影響經(jīng)線粒體途經(jīng)的ATP合成。 2．Idebenone在安全濃度范圍內(nèi)可以通過線粒體途經(jīng)抑制腫瘤細(xì)胞的生