南、北美大豆猝死綜合癥病菌PCR檢測方法的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、對南美大豆猝死綜合癥病菌Fusarium tucumaniae和北美大豆猝死綜合癥病菌Fusarium viRguliforme rDNA基因間間隔區(qū)(IGS)進行分析后設(shè)計篩選出三對特異性引物FT1/FT6、FT1/FT9和FV1/FV1A。利用FT1/FT6、FT1/FT9兩對特異性引物進行PCR反應(yīng)，南美大豆猝死綜合癥病菌能分別擴增出250bp、656bp左右的特異性PCR產(chǎn)物，利用特異性引物FV1/FV1A進行PCR反應(yīng)，北美大

2、豆猝死綜合癥病菌能擴增出228bp左右的特異性PCR產(chǎn)物，使用的菌株包括5株Fusarium virguliforme,3株只tucumaMac，1椿Fusaritium brasiliense,1株 Fusarium cuneirostrum．1椿 Fusariumphaseoli，6株P(guān)hytophthora sojae和21株從大豆或土壤中分離的Fusarium sp。利用Alu I和Sac I內(nèi)切酶對特異性引物FT1/FT6形成

3、的PCR產(chǎn)物進行酶切試驗，特異性PCR產(chǎn)物分別被切成232bp、18bp和158bp、92bp兩段產(chǎn)物；用AluI內(nèi)切酶對特異性引物FV1/FV1A形成的PCR產(chǎn)物進行酶切試驗，特異性PCR產(chǎn)物分別被切成144bp、84bp兩段產(chǎn)物，均與設(shè)計酶切序列相吻合。靈敏性試驗表明：利用特異性引物FT1/FT6、FV1/FV1A檢測到南、北美大豆猝死綜合癥病菌DNA的最低含量均為lpg/ul。土壤檢測試驗表明，利用FT1/FT6特異性引物和另一對

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