1、本文目的：克隆空腸彎曲菌peb1A基因，構(gòu)建peb1A基因原核表達(dá)載體并進(jìn)行表達(dá)。為空腸彎曲菌的基因工程疫苗研究的基礎(chǔ)驗(yàn)打下基礎(chǔ)。方法：(1)原核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定：PCR擴(kuò)增空腸彎曲菌peb1A基因，擴(kuò)增產(chǎn)物和質(zhì)粒pET-28a(+)用BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切后，分別用膠回收試劑盒回收目的片段，將載體和目的插入片段按1：3的比例用T4連接酶進(jìn)行連接，獲得pET-28a(+)-peb1A重組質(zhì)粒。制備大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞

2、，將pET-28a(+)-peb1A重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌JM109感受態(tài)細(xì)胞，將轉(zhuǎn)化的菌液涂布于含卡那霉素的LB瓊脂平板上培養(yǎng)過夜，然后從LB瓊脂平板上挑取陽性克隆接種于LB液體培養(yǎng)基中增殖。抽提質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定和PCR初步鑒定，經(jīng)初步鑒定后進(jìn)行測序鑒定。（2)抽提重組質(zhì)粒pET-28a(+)-peb1A后轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌BL21(DE3)，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)初步觀察重組蛋白PEB1的表