1、目的：本課題旨在根據(jù)不同粒徑納米粒靶向分布的特點(diǎn)，采用低分子量殼聚糖，以治療原發(fā)性肝癌的去甲斑蝥素為模型藥物，制備粒徑小、包封率高的殼聚糖納米粒，以期提高藥物的肝靶向性，減小毒副作用。 方法： (1)建立去甲斑蝥素HPLC體外分析方法，并測(cè)定了藥物的溶解度、水解形式、油水分配系數(shù)等基本理化性質(zhì)； (2)建立殼聚糖納米粒質(zhì)量評(píng)價(jià)體系，比較不同制備方法，運(yùn)用正交設(shè)計(jì)結(jié)合多元回歸擬合、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析優(yōu)化處方制備工藝，

2、對(duì)納米粒粒徑和包封率兩指標(biāo)同步優(yōu)化。 (3)采用改良的堿量法，以及紅外光譜(FT-IR)、差示掃描量熱法(DSC)、粉末X-my衍射和透射電鏡等方法和技術(shù)，對(duì)殼聚糖納米粒的表面特征、外觀形態(tài)進(jìn)行驗(yàn)證，并且，以透析袋考察納米粒膠體的體外釋放。 (4)將殼聚糖納米粒膠體作為口服制劑，采用大鼠在體腸循環(huán)方法，考察殼聚糖的促藥物胃腸道吸收作用。 (5)將納米粒作為注射制劑，通過(guò)大鼠尾靜脈注射給藥，研究藥物制劑的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)

3、特征。 結(jié)果： (1)確定去甲斑蝥素體外HPLC分析條件為：色譜柱：ODS柱(4.6×250mm，5um，大連依利特公司)；流動(dòng)相：乙腈：水(磷酸調(diào)節(jié)至pH3.1)=10：90(v/v)；流速：O.8ml/mm;柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：210nm；進(jìn)樣量：20ul。藥物在蒸餾水中的溶解度為84.27mg/ml，油水分配系數(shù)為0.087，在水溶液中以水解形式去甲斑蝥酸存在； (2)以粒徑、包封率(權(quán)重分別為0.5、

4、0.4)和載藥量等為評(píng)價(jià)指標(biāo)，將傳統(tǒng)的正交設(shè)計(jì)和多元回歸、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法結(jié)合，得到最佳的處方制備條件為：殼聚糖、三聚磷酸鈉溶液按50：20（v/v)混合時(shí)，濃度分別是2mg／ml、1.1mg／ml，反應(yīng)溫度(權(quán)重為0.1)為40℃。并且，實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在此條件下得到的處方平均粒徑為131±6nm，包封率可達(dá)45.12％，載藥量為7.3％。 (3)采用改良的堿量法，測(cè)得單位質(zhì)量空白殼聚糖納米粒的表面游離氨基量為1.08×10-2mol/

5、g。FT-IR圖譜中，殼聚3437cm-1處O-H的伸縮振動(dòng)吸收峰紅移至3420 cm-1處，1654 cm-1處的尖峰消失，1636cm-1處出現(xiàn)尖峰，1610cm-1處-NH2的面內(nèi)彎曲振動(dòng)峰向低波數(shù)位移至1534 cm-1處；納米粒的DSC、X衍射圖譜中，LCS與TPP的特征吸收峰均消失或轉(zhuǎn)移；透射電鏡(TEM)照片顯示納米粒近似球形、邊緣清晰。納米粒體外釋放符合Weibull概率函數(shù)，70min后釋放達(dá)到平衡。 (4)大

6、鼠在體腸循環(huán)實(shí)驗(yàn)中，在70、80、90mg／ml三種藥物濃度下，測(cè)得納米粒制劑的Kα、PA明顯大于參比制劑。 (5)大鼠尾靜脈注射后，藥-時(shí)曲線符合二室模型，其中，納米粒的K12大于參比制劑(P<0.05)，而K21,相對(duì)較小(P<0.05)。 結(jié)論： (1)HPLC方法中水占90％比例，因此，其實(shí)質(zhì)是對(duì)去甲斑蝥酸進(jìn)行分析，采用磷酸調(diào)節(jié)pH至酸性，使該酸的電離受到抑制，增進(jìn)藥物在ODS色譜柱上的保留。HPLC分析

7、方法的建立為藥物和制劑的考察評(píng)價(jià)奠定了基礎(chǔ)。 (2)將正交設(shè)計(jì)和多元回歸、人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)合，與傳統(tǒng)方法相比，充分發(fā)掘了數(shù)據(jù)的內(nèi)涵，提高了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的利用效率，通過(guò)對(duì)指標(biāo)的綜合優(yōu)化，得到的結(jié)果也更加理想。 (3)通過(guò)離子誘導(dǎo)法制備殼聚糖納米粒必定會(huì)損失相當(dāng)量的-NH2+，表面游離氨基含量的測(cè)定為制劑的微觀特性評(píng)價(jià)提供依據(jù)；根據(jù)FT-IR、DSC、X-衍射圖譜和TEM照片顯示，納米粒已經(jīng)形成，形成機(jī)理為三聚磷酸根與殼聚糖氨