1、目的：結(jié)合新疆葡萄和番茄的開發(fā)現(xiàn)狀，以番茄紅素和葡萄籽提取物為主要功效成分，研制純天然保健食品—復(fù)方降脂軟膠囊，并進(jìn)行毒理學(xué)、功效學(xué)評價，制定產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，研究降脂作用機(jī)制。
　　方法：通過單因素設(shè)計篩選影響葡萄籽中原花青素超臨界CO2萃取的主要因素，通過正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計研究萃取最佳工藝；以原花青素和番茄紅素為主要功效成分，按照設(shè)計處方進(jìn)行膠囊制備工藝研究、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究及毒理學(xué)研究；通過建立小鼠高脂血癥模型對膠囊處方功效進(jìn)行初步驗(yàn)證，

2、建立混合型大鼠高脂血癥模型進(jìn)行膠囊降脂作用及機(jī)制研究。
　　結(jié)果：1．復(fù)方降脂軟膠囊的研制：（1）葡萄籽原花青素超臨界CO2萃取工藝研究：1）單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：萃取壓力15MPa、溫度50℃、時間30min、攜帶劑加入量400mL條件下，原花青素收率最高；2）正交實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：葡萄籽中原花青素超臨界 CO2萃取的最優(yōu)工藝為：萃取壓力18MPa、溫度50℃、時間40min、攜帶劑加入量500mL。3）建立了高分離快速液相色譜測

3、定超臨界葡萄籽萃取液中原花青素含量的方法，在設(shè)定色譜條件下回歸方程為：y=639.0818x-28.961，R2=0.9997，在0.60～3.60mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。（2）復(fù)方降脂軟膠囊處方篩選及制備工藝研究：1）膠囊處方：葵花籽油63.5％，葡萄籽提取物8.0%，番茄紅素油樹脂28.5%，按處方配制膠囊內(nèi)容物藥液，其流動性、切斷性、內(nèi)容物懸浮穩(wěn)定性均符合制劑要求；在膠囊殼常規(guī)配方基礎(chǔ)上，確定TiO2、莧菜紅、葡萄紫分別占囊

4、殼總質(zhì)量的0.50%、0.20%、0.06％時，囊殼遮蔽及感觀效果最好，經(jīng)小試和中試證明制備工藝科學(xué)可行；2）制定了復(fù)方降脂軟膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，建立了膠囊中原花青素和番茄紅素的含量測定方法，經(jīng)考察，上述測定方法專屬性強(qiáng)，精密度、重復(fù)性好，準(zhǔn)確度佳；通過加速實(shí)驗(yàn)考察軟膠囊制劑的穩(wěn)定性，裝量差異、崩解時限檢查均符合《中華人民共和國藥典》（2010版）相關(guān)要求；膠囊內(nèi)容物中功效成分的含量、過氧化值等均符合相關(guān)規(guī)范的要求，產(chǎn)品的保質(zhì)期不少于2年。

5、2．復(fù)方降脂軟膠囊毒理學(xué)與功效學(xué)評價：（1）膠囊急性毒性研究：經(jīng)測試，膠囊對實(shí)驗(yàn)各性別小鼠體重?zé)o明顯影響（P＞0.05），動物各系統(tǒng)未出現(xiàn)明顯中毒癥狀和體征，膠囊的經(jīng)口急性毒性 MTD大于10g/kg?BW，屬實(shí)際無毒物。（2）膠囊內(nèi)容物處方、葡萄籽提取物和番茄紅素對正常小鼠和高脂血癥小鼠的影響：1）膠囊內(nèi)容物處方、葡萄籽提取物和番茄紅素?zé)o論單獨(dú)給藥還是聯(lián)合給藥，在實(shí)驗(yàn)劑量下均對正常小鼠的體重和血清TC、TG、HDL、LDL沒有明顯影響

6、（P＞0.05），各組動物生長狀態(tài)良好；2）膠囊處方中、高劑量組可降低高脂血癥小鼠血清TC和LDL水平，升高HDL水平（P＜0.05）；但葡萄籽提取物和番茄紅素單獨(dú)給藥對高脂血癥小鼠血脂沒有明顯影響（P＞0.05）。（3）復(fù)方降脂軟膠囊功效學(xué)研究：1）從第0周開始，各組動物與空白組比較體重均明顯增加（P＜0.01）；第1周時，膠囊高劑量組與模型組比較，體重增長放緩（P＜0.05）；第6周時，各干預(yù)組體重均低于模型組（P＜0.05）；2）

7、在給藥第4周和第6周，與模型組比較，膠囊各劑量組和陽性對照組均可顯著降低高脂血癥模型大鼠血清TG和TC含量（P＜0.05）；3）膠囊在給藥第4周和第6周，與模型組比較，膠囊高劑量組血清HDL水平升高（P＜0.05），膠囊各劑量組和陽性對照組大鼠血清LDL水平降低（P＜0.01）；4）與模型組比較，膠囊中、高劑量組和陽性對照組可降低高脂血癥模型大鼠血清ApoB、LPa含量及ApoB/ApoAI比值（P＜0.01），適當(dāng)提高血清ApoAI水

8、平，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；5）與模型組相比，膠囊各劑量組和陽性對照組可使肝組織SOD活性、GSH-Px活力上升，MDA含量降低(P＜0.01)。6）各組之間動物臟器指數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；7）病理組織學(xué)結(jié)果顯示，膠囊可以明顯改善由于高脂飲食造成的肝細(xì)胞病理損傷，隨著劑量的增加病理損傷改善程度越明顯。3．復(fù)方降脂軟膠囊作用機(jī)制研究：（1）膠囊對脂代謝關(guān)鍵酶的影響：1）膠囊中、高劑量組和陽性對照組可升高高脂血癥大

9、鼠肝組織中HL含量，降低HMG-CoA含量，與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；2）與模型組比較，膠囊高劑量組大鼠LCAT和LPL的含量升高（P＜0.01）。（2）膠囊降脂作用分子機(jī)制研究：1）與模型組比較，膠囊高劑量組動物肝臟 LDL-RmRNA的相對表達(dá)量上升（P＜0.05）；2）膠囊中、高劑量組動物肝臟PPARγmRNA的相對表達(dá)量高于模型組（P＜0.01）；3）膠囊可以上調(diào)高脂血癥模型大鼠肝臟 LXRamRNA的相對

10、表達(dá)量，但各組動物間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；4）膠囊各劑量組動物肝臟SR-BImRNA的相對表達(dá)量上升，其中高劑量組與模型組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；5）與模型組比較，膠囊各劑量組肝臟 ABCA1mRNA相對表達(dá)量上升，其中高劑量組與模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：1．葡萄籽中原花青素超臨界 CO2萃取的最優(yōu)工藝為：萃取壓力18MPa、溫度50℃、時間40min、攜帶劑加入量500mL，

11、放大實(shí)驗(yàn)證實(shí)其工藝方法可靠，可用于工業(yè)生產(chǎn)；用高分離快速液相色譜檢測萃取液中原花青素含量，方法準(zhǔn)確、可靠，重復(fù)性好，精密度佳，可以作為葡萄籽超臨界CO2萃取液中原花青素含量測定的方法；膠囊處方設(shè)計合理，制備工藝科學(xué)可行，質(zhì)量可控，相關(guān)指標(biāo)符合國家藥典（2010版）等規(guī)范要求，保質(zhì)期不少于2年；膠囊中功效成分檢測方法準(zhǔn)確可靠，原花青素平均含量87.90mg/g，RSD為1.32%，番茄紅素含量為15.24mg/g，RSD為1.27%；2．

12、膠囊經(jīng)口急性毒性 MTD大于10g/kg·BW，屬實(shí)際無毒物；按膠囊設(shè)計處方配制的內(nèi)容物，可以有效降低高脂血癥小鼠血清TC、LDL水平，升高血清HDL水平，降脂效果明顯優(yōu)于番茄紅素和原花青素單獨(dú)應(yīng)用，提示二者在降脂功效方面具有協(xié)同作用；膠囊中試產(chǎn)品能顯著降低高脂血癥模型大鼠血清 TG、TC、LDL、ApoB和LPa水平，降低 ApoB/ApoA1比值，適當(dāng)升高HDL和ApoA1水平；能提高機(jī)體抗氧化酶活性，降低MDA含量；能減輕高脂飲食