1、大腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，對人類的生命和健康構成了嚴重的威脅。在全球范圍內，大腸癌的年發(fā)病人數(shù)超過50萬，發(fā)病率居第三位，在男性中僅次于胃癌和肺癌，在女性中僅次于乳腺癌。近幾年，隨著我國環(huán)境及飲食習慣的改變和人口的老齡化，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。大腸癌最具特征性的是常發(fā)生早期轉移，這嚴重影響大腸癌患者的健康和療效。因此與大腸癌轉移相關的因素已經(jīng)成為眾多學者研究的熱點，不僅有利于發(fā)現(xiàn)大腸癌轉移的分子機理，而且還能為臨床診治、藥物篩

2、選及預后判斷提供新的依據(jù)，具有巨大的臨床價值和社會意義。
　　第一部分
　　大腸癌細胞的培養(yǎng)和轉移能力的相關性研究
　　【研究目的】
　　比較不同表達PI3K p85α蛋白的大腸癌細胞株LoVo和SW480之間體外轉移能力的差異。
　　【研究方法】
　　本課題負責人前期的研究證明PI3K p85α蛋白在大腸癌細胞株LoVo中的表達明顯高于SW480，以大腸癌細胞株LoVo和SW480為研究對象，采用異

3、質粘附實驗和遷移實驗確定兩個細胞株之間體外黏附和遷移能力的差異。驗證PI3K p85α表達的高低與大腸癌細胞體外轉移能力的相關性。
　　【結果】
　　1.異質粘附實驗顯示：
　　大腸癌細胞株LoVo的黏附能力明顯高于大腸癌細胞株SW480。
　　2.遷移實驗顯示：
　　大腸癌細胞株LoVo的遷移能力明顯高于大腸癌細胞株SW480。
　　【結論】
　　1.PI3K p85α蛋白表達量較高的大腸癌細

4、胞株LoVo的黏附能力高于PI3K p85α蛋白表達量較低的大腸癌細胞株SW480。
　　2.PI3K p85α蛋白表達量較高的大腸癌細胞株LoVo的遷移能力高于PI3K p85α蛋白表達量較低的大腸癌細胞株SW480。
　　3.大腸癌細胞的體外黏附能力和遷移能力與PI3K p85α蛋白表達量的高低具有相關性。PI3K p85α蛋白表達量高的體外黏附能力和遷移能力較強。
　　第二部分
　　PI3K p85α慢病毒

5、干擾載體的構建及轉染
　　【研究目的】
　　構建PI3K p85α慢病毒干擾載體，轉染大腸癌細胞株LoVo和SW480，建立缺失表達PI3K p85α的大腸癌細胞株LoVo和 SW480。
　　【研究方法】
　　采用課題申請人已經(jīng)證明有效的RNA干擾系列，構建PI3K p85α重組干擾載體并篩選、鑒定及擴增。行慢病毒干擾載體感染。最后用增殖實驗及Western-Blot檢測PI3K p85α的干擾效果。
　

6、　【結果】
　　1.干擾后大腸癌細胞株 LoVo和 SW480的增殖能力較未干擾的細胞株明顯減弱。
　　2.干擾后Western-Blot實驗檢測大腸癌細胞株 LoVo和SW480中PI3K p85α的表達明顯降低。
　　【結論】
　　1.成功構建PI3Kp85α慢病毒干擾載體，其能在體外高效轉染大腸癌細胞。
　　2.PI3Kp85α慢病毒干擾載體成功轉染大腸癌細胞株LoVo和SW480，建立穩(wěn)定缺失表達P

7、I3K p85α蛋白的大腸癌細胞株，達到體外細胞實驗的要求。
　　3.靶向PI3Kp85α的RNA干擾技術可以序列特異性地抑制大腸癌細胞株LoVo和SW480中PI3K p85α蛋白的表達，在體外實驗中對大腸癌的增殖起到了明顯的抑制作用。
　　第三部分
　　PI3K p85α表達的變化對大腸癌細胞株LoVo和SW480體外侵襲和遷移的影響。
　　【研究目的】
　　通過劃痕實驗、遷移實驗及侵襲實驗進一步驗證P

8、I3K p85α表達變化對大腸癌細胞株LoVo和SW480體外遷移和侵襲的影響。
　　【研究方法】
　　利用慢病毒干擾載體轉染成功的大腸癌細胞株LoVo和SW480為實驗組，轉染空載體的大腸癌細胞株LoVo和SW480及未轉染載體的大腸癌細胞株LoVo和SW480為實驗對照組。在體外行腫瘤細胞的劃痕實驗、遷移實驗及侵襲實驗。研究不同表達PI3K p85α蛋白的細胞株之間的轉移能力的差異。
　　【結果】
　　1.劃

9、痕實驗顯示：
　　轉染PI3Kp85α干擾載體的大腸癌細胞株LoVo和SW480向劃痕中心遷移的距離明顯少于陰性轉染和未轉染的大腸癌細胞株LoVo和SW480。而陰性轉染和未轉染的大腸癌細胞株LoVo和SW480的向劃痕中心遷移的距離無明顯差別。
　　2.遷移實驗顯示：
　　轉染PI3Kp85α干擾載體的大腸癌細胞株LoVo和SW480的遷移能力明顯低于陰性轉染和未轉染的大腸癌細胞株LoVo和SW480。而陰性轉染和未

10、轉染的大腸癌細胞株LoVo和SW480的遷移能力無明顯差別。
　　3.侵襲實驗顯示：
　　轉染PI3Kp85α干擾載體的大腸癌細胞株 LoVo和 SW480的侵襲 Matrigel基底膜能力和遷移能力明顯低于陰性轉染和未轉染的大腸癌細胞株 LoVo和 SW480。而陰性轉染和未轉染的大腸癌細胞株 LOVO和 SW480的侵襲 Matrigel基底膜能力和遷移能力無明顯差別。
　　【結論】
　　1.PI3K p85