1、目的：腦血管病是常見病、多發(fā)病，通常急性起病，留下嚴(yán)重的并發(fā)癥，以其極高的致死率和致殘率危害人類的生命，其中缺血性腦卒中占全部腦血管病的70％。體溫是影響腦缺血預(yù)后的一個(gè)重要因素，發(fā)熱通過多種機(jī)制可直接或間接地與卒中相關(guān)。近來，大量基礎(chǔ)及臨床研究發(fā)現(xiàn)，亞低溫對腦缺血有明顯的保護(hù)作用，但其具體機(jī)制尚不完全清楚。低溫可在不同方面抑制神經(jīng)元缺血損傷的各種途徑，從而有望成為腦缺血治療的有效方法。生存素一Survivin，屬于凋亡抑制蛋白中的一員

2、，具有重要的抑凋亡作用。因?yàn)镾urvivin的獨(dú)特分布特點(diǎn)，近來對其研究多局限于腫瘤治療方面，腦缺血損傷后引起的神經(jīng)元凋亡是否有Survivin的表達(dá)，文獻(xiàn)報(bào)道較少。Bcl-2是首先從濾泡性淋巴瘤中分離出來的，現(xiàn)已證實(shí)它是抑制組織細(xì)胞凋亡的基因，這些細(xì)胞包括腫瘤細(xì)胞、心肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等。本實(shí)驗(yàn)通過對腦缺血的動物模型實(shí)施亞低溫治療，觀察Bcl-2表達(dá)，試闡述低溫的抑制凋亡機(jī)制，并觀察神經(jīng)細(xì)胞中是否有Survivin的表達(dá)。

3、 方法：SD雄性大鼠54只，隨機(jī)分為2大組：假手術(shù)組-PS組(18只)和缺血模型組-IS組(36只)；缺血模型組再分2亞組，分別為常溫組-NO組和亞低溫組-HY組；各亞組分3個(gè)時(shí)間點(diǎn)：12、24、48h，各時(shí)間點(diǎn)為6只。模型制作： 采用改良線栓法建立大鼠大腦中動脈梗塞模型，低溫組應(yīng)用冰塊對大鼠大腦病變側(cè)予以亞低溫治療，維持體溫在32-34℃，持續(xù)4-6h，之后緩慢復(fù)溫。常溫組維持體溫在初始溫度。假手術(shù)組只麻醉后暴露血管，

4、不插線。術(shù)后在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)應(yīng)用三種方法進(jìn)行神經(jīng)功能評分，之后過量麻醉處死大鼠，取將腦組織冠狀切成6個(gè)間隔2mm的腦片，其中第4片用4％多聚甲醛固定，24h后石蠟包埋并切成6μm的組織切片。這些切片部分進(jìn)行HE染色用以組織病理學(xué)分析，部分常規(guī)免疫組化染色觀察survivin和bcl-2的表達(dá)。其余腦片給予TTC染色后固定，計(jì)算梗塞體積。 結(jié)果：1 神經(jīng)功能評分結(jié)果顯示：低溫組(2.17±0.75)大鼠行為功能缺陷較常溫組(3.17±

5、0.75)明顯改善，差異有顯著意義，P<0.05。 2 腦組織切片HE染色光鏡下觀察：在缺血低溫組和常溫組中，大鼠右側(cè)大腦中動脈供血區(qū)可見染色欠佳的梗死區(qū)。在這些腦區(qū)發(fā)現(xiàn)大腦中動脈及小動脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷并有血栓形成，皮層和海馬區(qū)的神經(jīng)元胞核皺縮，胞漿空泡化。而假手術(shù)組沒有梗死灶，神經(jīng)元胞漿飽滿，染色均勻。 3 TTC染色結(jié)果顯示：缺血低溫組(0.12±0.02)的梗塞體積較常溫組(0.15±0.01)顯著減小，差異有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 4 免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：Bcl-2在缺血12h即在梗死區(qū)的周邊顯著表達(dá)，主要定位于神經(jīng)元的核膜和胞膜上，胞漿少見。與常溫組(57.30±3.39)的陽性細(xì)胞數(shù)比較，低溫組(72.83±4.58)顯著增加，而假手術(shù)組(6.83±4.31)的表達(dá)甚少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。Survivin在缺血區(qū)的周邊也有表達(dá)，主要定位于神經(jīng)元的胞漿中和小血管內(nèi)皮細(xì)胞上。與常溫組(35.83±4.58)比較，低

7、溫組(69.33±8.69)顯著增加，而假手術(shù)組(5.32±1.02)的表達(dá)甚少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。 結(jié)論：1 亞低溫(33～35℃)是有效的神經(jīng)保護(hù)措施，可以通過促進(jìn)Bcl-2和survivin的表達(dá)、影響神經(jīng)元相關(guān)基因的表達(dá)等機(jī)制，減少腦缺血后神經(jīng)元凋亡，繼而起到腦保護(hù)作用。 2 survivin作為抗凋亡家族的新成員，可以在腦缺血缺氧損傷后表達(dá)。 3 Bcl-2與survivin表達(dá)趨勢相