1、研究背景:
　　在大多數國家中,卵巢癌是女性最致命的婦科惡性腫瘤之一[1]。其中又以上皮性卵巢癌最常見,大約占卵巢惡性疾病的70％,女性惡性腫瘤中居第六位,癌癥相關死亡原因居第五位[2]。大多數患者早期無明顯癥狀,70%患者發(fā)現時已屬晚期[3]。在過去幾十年里,盡管手術聯合化療等治療手段的不斷進步,但卵巢癌復發(fā)率和死亡率仍然很高[4-5]。其五年生存率僅有30-40%[6],死亡率居婦科惡性腫瘤首位。因此,迫切的尋求對抗卵巢癌的生

2、物標志物,以便更好的早期診斷和早期治療是目前研究的重點。
　　Basigin(CD147,EMMPRIN,neurothelin,5A11,gp42,OX-47,CE9)是一種高度糖基化的單次跨膜糖蛋白,屬于免疫球蛋白超家族粘附分子(IgSF)成員[7-8],分子量58KDa,有四種剪接變異體。Basigin最為主要的功能是刺激腫瘤細胞及其周圍成纖維細胞,產生多種基質金屬蛋白酶(MMPs),降解細胞外基質,促進腫瘤細胞的浸潤和轉移

3、[9-10]。此外,Basigin的功能還包括胚胎發(fā)育、T細胞活化、生殖、神經及視網膜功能。Basigin在多種惡性腫瘤中呈高表達,與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉移密切相關。Basigin的高表達還與卵巢癌患者的預后不良有關,可作為卵巢癌獨立的預后因素。
　　Basigin具有4個剪接變異體,對于其剪接變異體的研究較少,其在卵巢癌的表達與功能如何是相關領域的研究前沿之一。本研究首次報道3種Basigin剪接變異體在卵巢癌細胞系及卵巢癌組

4、織中的表達情況,并且通過研究Basigin-2與臨床病理資料的相關性,發(fā)現Basigin-2與上皮性卵巢癌患者的預后密切相關。我們進一步在卵巢癌細胞系中驗證了Basigin-2的生物學功能,初步評估了Basigin-2作為卵巢癌靶點的可行性,為卵巢癌的治療提供了新的思路。
　　目的:
　　1.明確Basigin剪接變異體在上皮性卵巢癌的表達情況。
　　2.明確Basigin-2的表達與上皮性卵巢癌的臨床病理特征及預后的

5、相關性。
　　3.明確Basigin-2對卵巢癌細胞侵襲轉移的影響。
　　方法:
　　1.應用RT-PCR、Taqman實時熒光定量-PCR、western-blot觀察Basigin剪接變異體在上皮性卵巢癌細胞系及卵巢癌組織中的表達。
　　2.Basigin-2的表達與其臨床病例因素間的關系及預后的相關性分析。
　　a)運用免疫組織化學技術分析Basigin-2在146例上皮性卵巢癌石蠟標本組織中的表達;

6、
　　b)運用Kaplan Meier analysis和Cox proportional hazards model分析Basigin-2與臨床病例因素間的關系及預后的相關性分析。
　　3.pcDNA3.1-Basigin-2真核表達載體和SiRNA-Basigin-2分別轉染低轉移卵巢癌細胞株HO-8910和高轉移卵巢癌細胞株HO-810PM,觀察轉染后Basigin-2的蛋白表達,并用明膠酶譜法、Transwell侵襲

7、小室、劃痕試驗檢測轉染后卵巢癌細胞的生物學功能。
　　結果:
　　1.觀察Basigin剪接變異體在上皮性卵巢癌細胞系及卵巢癌組織中的表達。
　　a)RT-PCR分析Basigin剪接變異體在五株上皮性卵巢癌細胞系的表達:mRNA水平顯示Basigin-2,Basigin-3和Basigin-4在五種卵巢癌細胞系中均有表達;
　　b)Taqman實時熒光定量PCR分析71例卵巢癌組織標本和27例正常卵巢組織的Ba

8、sigin-2、Basigin-3、Basigin-4mRNA的表達結果:Basigin-2和Basigin-4在上皮性卵巢癌組織中的表達水平顯著高于正常卵巢組織(Basigin-2,P<0.0001;Basigin-4,P=0.0129),Basigin-3的表達水平略有升高(P=0.2703),但無統(tǒng)計學意義;
　　c)Taqman實時熒光定量PCR結果:Basigin-2和Basigin-4在低轉移卵巢癌細胞株HO-8910

9、的表達水平低于高轉移卵巢癌細胞株HO-8910PM(P<0.05),但Basigin-2的平均拷貝數遠高于Basigin-4(約100倍),有統(tǒng)計學意義;Basigin-3mRNA在低轉移卵巢癌細胞株HO-8910和高轉移卵巢癌細胞株HO-8910PM表達差異,但無統(tǒng)計學意義(P>0.05);
　　d)Western blot分析Basigin-2在五株卵巢癌細胞系的蛋白表達:Basigin-2在五株卵巢癌細胞系中均有表達,但在高

10、轉移卵巢癌細胞株HO-8910PM表達水平明顯高于低轉移卵巢癌細胞株HO-8910。
　　2.Basigin-2的表達與其臨床病例因素間的關系及預后的相關性分析。
　　a)Basigin-2在146例上皮性卵巢癌組織病理切片中的表達,Basigin-2主要分布在細胞膜上;
　　b)卵巢癌組織中的Basigin-2蛋白表達水平與淋巴血管間隙浸潤和淋巴結轉移相關(P=0.012,P=0.017)。Basigin-2的表達水

11、平與患者年齡、FIGO分期、分級及組織病理學類型之間無統(tǒng)計學意義(P>0.05);
　　c)臨床病理資料分析說明在上皮性卵巢癌患者中Basigin-2高表達組的PFS和OS較短。
　　d)單因素Cox proportional分析,Basigin-2的表達與PFS和OS密切相關,有統(tǒng)計學意義(PFS,P<0.001;OS,P=0.002);
　　e)多因素Cox proportional分析發(fā)現Basigin-2和FI

12、GO分期是PFS和OS的判斷預后的指標。
　　3.pcDNA3.1-Basigin-2真核表達載體對卵巢癌細胞MMPs分泌、侵襲及遷移的生物學行為的影響
　　a)Western blot的蛋白表達:Basigin-2蛋白在pcDNA3.1-Basigin-2傳染組的表達高于其對照組pcDNA3.1和空白組(P<0.05);
　　b)明膠酶譜實驗結果:pcDNA3.1-Basigin-2傳染HO-8910細胞后MMPs分

13、泌高于其對照組pcDNA3.1和空白組(P<0.05);
　　c)細胞劃痕實驗結果:pcDNA3.1-Basigin-2傳染HO-8910細胞后與對照組pcDNA3.1和空白組相比,促進了細胞的遷移能力(P<0.05);
　　d)細胞transwell侵襲實驗結果:pcDNA3.1-Basigin-2傳染HO-8910細胞后與對照組pcDNA3.1和空白組相比,促進了細胞的侵襲能力(P<0.05)。
　　4.Basig

14、in-2-siRNA特異性沉默Basigin-2的表達對卵巢癌細胞MMPs分泌、侵襲及遷移的的生物學行為的影響
　　a)Westernblot的蛋白表達:Basigin-2蛋白在Basigin-2siRNA傳染組的表達低于其對照組和空白組(P<0.05);
　　b)明膠酶譜實驗結果:Basigin-2-siRNA傳染HO-8910細胞后MMPs分泌低于其對照組和空白組(P<0.05);
　　c)細胞劃痕實驗結果:Bas

15、igin-2-siRNA傳染HO-8910細胞后與對照組和空白組相比,抑制了細胞的遷移能力(P<0.05);
　　d)細胞transwell侵襲實驗結果:Basigin-2-siRNA傳染HO-8910細胞后與對照組和空白組相比,抑制了細胞的侵襲能力(P<0.05);
　　結論:
　　1.本研究確定了Basigin剪接變異體(Basigin-2、Basigin-3、Basigin-4)在卵巢癌組織和細胞系中的表達情況,

16、證明Basigin-2和Basigin-4在卵巢癌組織中特異表達,其中Basigin-2的表達量遠高于Basigin-4,說明Basigin-2在卵巢癌的作用更為重要。
　　2.發(fā)現Basigin-2在卵巢癌中高表達,Baigin-2的表達與卵巢癌的淋巴血管間隙浸潤和淋巴結轉移有關,Basigin-2在卵巢癌的惡性潛能中起非常最要的作用。
　　3.Basigin-2與卵巢癌的FBS、OS有關,Basigin-2表達陽性的患者