1、目的：1.研究哮喘大鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)、Rho激酶2(rhoassociated coiled coil forming proteinkinase 2,Rock2)和轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1,FGF-β1)的表達(dá)情況; 2.觀察糖皮質(zhì)激素對(duì)哮喘大鼠急性發(fā)作期HIF-1α、Rock2和TGF-β1表達(dá)

2、的影響; 方法：48只清潔級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為哮喘組(A組)、正常對(duì)照組(C組)、地塞米松治療組(D組)和布地奈德治療組(B)4組,每組12只,用卵白蛋白(ovalbumin,OVA)制備大鼠哮喘模型,C組用生理鹽水代替OVA進(jìn)行致敏和激發(fā).各組大鼠于末次激發(fā)24小時(shí)后麻醉并放血致死,結(jié)扎左肺門后切除左肺觀察大鼠肺組織病理變化,右肺行支氣管肺泡灌洗獲取支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,

3、BALF)后,對(duì)BALF沉渣計(jì)細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù).分別免疫組織化學(xué)法和原位雜交法測(cè)定肺組織中HIF-1α、Rock2及TGF-βlmRNA表達(dá)情況,并進(jìn)行相關(guān)分析. 結(jié)果：1.BALF中細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù):A組BALF中細(xì)胞總數(shù)(2.54±0.20)×10<'9> /L、EOS﹪(4.37±0.82)﹪、PMN﹪(11.75±3.03)﹪和Lym﹪(25.21±4.59) ﹪均顯著高于C組[分別為(1.11±0.11)x 10<

4、'9>/L、(0.97±0.57)﹪、(3.31±0.83)﹪和(16.46±3.25)﹪](均為P<0.01),Mφ﹪(58.67±5.28) ﹪顯著低于C組(79.26±3.78)﹪(P<0.01);D組和B組除PMN﹪[(10.03 ±3.33)﹪和(13.25±3.24)﹪]與A組相比無顯著性差異外(均為P>0.05),細(xì)胞總數(shù)[(0.99±0.23)×10<'9>/L和(1.01±0.12)×10<'9>/L]以及EOS﹪[(

5、2.22±0.80)﹪和(2.57±1.18)﹪]、Lym﹪[(19.44±5.37)﹪和(17.98±4.60)﹪]均低于A組(均為P<0.01),M巾﹪[(68.31±7.16)﹪和(66.20±5.74)﹪]顯著高于A組(均為P<0.01).D組和B組相比,上述各指標(biāo)未見顯著性差異(均為P>0.05). 2.肺組織病理改變HE染色觀察結(jié)果:C組大鼠氣道及肺實(shí)質(zhì)無異常的炎癥改變,氣道粘膜上皮及肺泡結(jié)構(gòu)完整.A組大鼠可見支氣管

6、和血管周圍有大量的炎性細(xì)胞浸潤,以淋巴細(xì)胞、EOS和中性粒細(xì)胞為主.氣道腔內(nèi)有大量的炎癥細(xì)胞及分泌物充塞,形成黏液栓.同時(shí)可見氣道上皮細(xì)胞的損傷和脫落、基底膜增厚且形態(tài)不規(guī)則以及平滑肌肥大增生等改變.B組和D組大鼠氣道腔內(nèi)無明顯分泌物,支氣管和血管周圍炎癥細(xì)胞浸潤與A組相比明顯減輕. 3.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HIF-1α表達(dá)結(jié)果:A組肺組織HIF-1α表達(dá)的吸光度值(A值)(0.218±0.026)顯著高于C組(0.137±0.0

7、28)(P<0.01),D組和B組HIF-1α表達(dá)的吸光度值[分別為(0.158±0.029)和(0.164±0.022)]分別高于C組(均為P<0.05),B組和D組肺組織HIF-1α表達(dá)的吸光度值分別顯著低于A組(均為P<0.01). 4.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Rock2蛋白表達(dá)結(jié)果:A組肺組織Rock2表達(dá)的吸光度值(0.159±0.017)顯著高于C組(0.077±0.011)(P<0.01), D組和B組[分別為(0.08

8、3±0.010)和(0.086±0.011)]與C組相比無顯著性差異(均為P>0.05).B組和D組均顯著低于A組(均為P<0.01). 5.原位雜交法檢測(cè)TGF-β1mRNA表達(dá)結(jié)果:A組肺組織TGF-β1 mRNA表達(dá)的吸光度值(0.128±0.012)顯著高于C組(0.069±0.011)(P<0.01),D組與B組[分別為(0.074±0.012)和(0.070±0.010)]與C組相比無顯著性差異(均為P>0.05).

9、B組和D組均顯著低于A組(均為P<0.01). 6.相關(guān)分析結(jié)果:(1)肺組織中HIF-1α與Rock2的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.689,P<0.01);(2)肺組織中HIF-1α與TGF-β1的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.770,P<0.01);(3)腫組織中TGF-β1與Rock2的表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)(r=0.859,P<0.01). 結(jié)論：1.哮喘急性發(fā)作期HIF-1α、Rock2和TGF-β1的表達(dá)顯著