1、第一部分胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子的分離純化及活性檢測(cè) 目的:純化胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子(placentafactorPF)和篩選活性最顯著的組分。 方法:將新鮮人胎盤(pán)去筋膜，生理鹽水沖凈、剪碎勻漿，反復(fù)凍融后，透析，取透析外液凍干，上樣于SephadexG-25凝膠層析柱，洗脫，收集各組份。通過(guò)培養(yǎng)淋巴細(xì)胞，用MTT法鑒定PF純化產(chǎn)物的活性，反相高效液相色譜分析純產(chǎn)物的純度，基質(zhì)輔助激光解吸附電離串行飛行時(shí)間質(zhì)譜測(cè)定產(chǎn)物的分子量。

2、 結(jié)果:PF經(jīng)SephadexG-25凝膠柱純化后，得到的第四峰具有明顯促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖活性，是胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子的主要活性成分，是分子量為6737.813Da的多肽，其純度為82％，結(jié)論胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子經(jīng)SephadexG-25凝膠柱純化得到的第四峰是胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子的主要活性成分，其純度為82％，分子量為6737.813Da。 第二部分胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 目的：觀察胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子(place

3、ntafactorPF)對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 方法：培養(yǎng)PC12細(xì)胞，用MTT法觀察PF對(duì)體外無(wú)血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞存活率的影響及PF對(duì)低血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞增殖的影響，普通光學(xué)顯微鏡觀察PC12細(xì)胞形態(tài)的變化。 結(jié)果：對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞加入不同濃度的PF培養(yǎng)44小時(shí)后，PF在濃度為50μg/ml、25μg/ml、12.5μg/ml和6.25μg/ml時(shí)可以顯著提高無(wú)血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞的存活率(P<0.0

4、5)。對(duì)低血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞加入不同濃度的PF培養(yǎng)68小時(shí)后，PF在濃度為12.5μg/ml和6.25μg/ml時(shí)可以顯著提高PC12細(xì)胞的數(shù)量(P<0.01)。對(duì)低血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞加入不同濃度的PF培養(yǎng)10天，PF在濃度為3.13μg/ml和1.56μg/ml作用第6天時(shí)，細(xì)胞長(zhǎng)出突起。 結(jié)論：PF能提高無(wú)血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞的存活率，促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化。 第三部分PF純化第四峰(PFI

5、V)對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響 目的：觀察胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子純化第四峰(PFIV)對(duì)PC12細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。 方法：培養(yǎng)PC12細(xì)胞，用MTT法觀察PFIV對(duì)體外無(wú)血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞存活率的影響及PFIV對(duì)低血清培養(yǎng)PC12細(xì)胞增殖的影響，普通光學(xué)顯微鏡觀察PC12細(xì)胞形態(tài)的變化。 結(jié)果：對(duì)無(wú)血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞加入不同濃度的PFIV培養(yǎng)44小時(shí)后，在濃度為15μg/ml、7.5μg/ml、3.75μg/ml和1.

6、88μg/ml時(shí)可以顯著提高無(wú)血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞的存活率(P<0.05)。對(duì)低血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞加入不同濃度的PFIV培養(yǎng)68小時(shí)后，在濃度為0.47μg/ml和0.235μg/ml時(shí)可以顯著提高PC12細(xì)胞的數(shù)量(P<0.01)。對(duì)低血清培養(yǎng)的PC12細(xì)胞加入不同濃度的PFIV培養(yǎng)10天，PFIV在濃度為0.118μg/ml和0.059μg/ml作用第6天時(shí)，細(xì)胞長(zhǎng)出突起。 結(jié)論：胎盤(pán)免疫調(diào)節(jié)因子第四峰(PFIV)能提