1、本研究采用血栓性大鼠腦缺血模型，研究溶栓與腦脈通聯(lián)合治療對大鼠腦缺血的影響，并進一步探討腦脈通的保護機制。為臨床開展溶栓治療奠定理論基礎(chǔ)。 研究目的：①從神經(jīng)功能缺損和病理學(xué)方面，評價溶栓療法聯(lián)合中藥復(fù)方腦脈通顆粒治療急性血栓性腦梗死的療效優(yōu)勢，即增強療效、降低溶栓藥物導(dǎo)致的腦水腫和出血延長治療時間窗等，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。②從腦微血管結(jié)構(gòu)、血管基底膜明膠酶系統(tǒng)和纖溶酶系統(tǒng)的變化，揭示溶栓療法聯(lián)合中藥復(fù)方腦脈通顆粒治療急性血

2、栓性腦梗死時對腦微血管損傷的保護作用及機制。③從神經(jīng)細胞凋亡及其與凋亡相關(guān)基因蛋白表達等的變化，闡明溶栓療法聯(lián)合中藥復(fù)方腦脈通顆粒治療急性血栓性腦梗死時對神經(jīng)細胞的保護作用及其機制。 研究方法：自體血栓法制作大鼠局灶性腦缺血模型，假手術(shù)做對照組，分別于腦缺血3、6、9h溶栓治療，每個缺血時間又分為模型組、尿激酶溶栓組、腦脈通組、聯(lián)合用藥組(尿激酶聯(lián)合腦脈通組)。各組動物造模前4天灌胃，假手術(shù)組、模型組、尿激酶組以等體積生理鹽水灌

3、胃。灌胃第5天參考改良的Zhang法應(yīng)用自體血栓結(jié)合線栓制備血栓栓塞性大鼠大腦中動脈阻塞模型，造模成功后在各時間點區(qū)域動脈經(jīng)導(dǎo)管給藥，其中模型組3、6、9h經(jīng)導(dǎo)管給予生理鹽水，尿激酶組區(qū)域動脈經(jīng)導(dǎo)管給予尿激酶，腦脈通為灌胃用藥，聯(lián)合用藥組中尿激酶區(qū)域動脈經(jīng)導(dǎo)管給藥，所聯(lián)合的腦脈通為灌胃用藥。溶栓治療24h后取材，應(yīng)用光鏡、電鏡和圖像分析系統(tǒng)觀察腦組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的變化，評定神經(jīng)癥狀、測定腦組織含水量、腦組織梗死面積，裸眼觀察顱內(nèi)出血轉(zhuǎn)化

4、率。應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測腦缺血不同時間不同組別Ⅳ型膠原、層連蛋白、免疫球蛋白G、TUNEL、bcl-2、bax和Caspase-3蛋白表達的相對含量的動態(tài)變化。 研究結(jié)果：①模型組隨缺血時間延長神經(jīng)評分、梗塞面積、含水量依次增加，較假手術(shù)組有統(tǒng)計學(xué)差異。各用藥組較模型組腦損傷程度減輕：表現(xiàn)在神經(jīng)評分降低，梗塞面積減小，含水量降低。缺血3h尿激酶組效果尤為顯著；缺血時間延長至9h，聯(lián)合用藥組效果較尿激酶組好。光鏡下，各組缺血3

5、h可見少量神經(jīng)細胞缺血變性和輕微神經(jīng)細胞腫脹；缺血6h變性的神經(jīng)細胞數(shù)量增多，腦組織水腫范圍擴大，并累及額頂葉皮質(zhì)；缺血9h可見大量神經(jīng)細胞缺血變性和明顯的神經(jīng)細胞腫脹。TUNEL陽性細胞及電鏡結(jié)果顯示缺血3h細胞凋亡開始增多；缺血6h細胞凋亡較3h增多；缺血9h細胞凋亡數(shù)目較6h顯著增多。電鏡下檢測到大量前凋亡神經(jīng)細胞，其時間變化與TUNEL結(jié)果一致。假手術(shù)組大鼠神經(jīng)功能、病理所見和TUNEL檢測均未見明顯的異常變化，缺血3h各用藥組

6、以尿激酶組腦保護作用最明顯，缺血6、9h以聯(lián)合用藥組腦保護作用最明顯。裸眼觀察顱內(nèi)出血轉(zhuǎn)化率：尿激酶組顱內(nèi)出血率較模型組和腦脈通組明顯增高，聯(lián)合用藥組較尿激酶組明顯降低。②IgG表達變化：模型組及各用藥組3、6h免疫球蛋白G表達均較假手術(shù)組無顯著差異，模型組及各用藥組9h均較假手術(shù)組顯著增多，各用藥組9hIgG表達較模型組減少，以聯(lián)合用藥組效果最明顯。③Ⅳ型膠原、層連蛋白表達變化：模型組3、6、9h隨時間延長二者表達減少，均較假手術(shù)組有

7、顯著意義；各用藥組較模型組表達增多，缺血3h以尿激酶組效果明顯，缺血6、9h以聯(lián)合用藥組效果明顯。④bcl-2表達的動態(tài)變化：模型組較假手術(shù)組顯著降低，3h、6h、9h表達逐漸減少；各用藥組較模型組bcl-2蛋白表達增多，但未恢復(fù)到假手術(shù)組水平，缺血3h以尿激酶組作用明顯，6、9h以聯(lián)合用藥組作用明顯。⑤bax和Caspase-3蛋白表達變化：模型組較假手術(shù)組顯著增高，3h、6h、9h表達逐漸增高；各用藥組較模型組表達減少，但未恢復(fù)到假

8、手術(shù)組水平，缺血3h以尿激酶組作用明顯，6、9h以聯(lián)合用藥組作用明顯。 研究結(jié)論：①自體血栓栓塞MCAO模型操作技術(shù)穩(wěn)定，重復(fù)性好，為評價溶栓藥物的治療提供了一個較為理想的動物模型。②神經(jīng)評分、梗塞面積、腦組織含水量是評價腦缺血后腦損傷的有效指標，單純尿激酶溶栓以缺血3h效果明顯，腦脈通聯(lián)合溶栓在缺血9h明顯較單純尿激酶溶栓效果好，為擴大溶栓治療時間窗提供了可能。③大鼠腦缺血損傷與血腦屏障微血管基底膜成分(Ⅳ型膠原和層連蛋白)降