1、第一部分:TNF-α誘導(dǎo)SD大鼠胰島細胞凋亡的研究
　　目的:探討腫瘤壞死因子-α(TNF-α)誘導(dǎo)體外SD大鼠胰島細胞凋亡及Bcl-2和BaxmRNA表達水平的影響。
　　方法:成年雄性SD大鼠胰腺經(jīng)膠原酶P消化,Ficoll400純化后獲得胰島,在37℃,5％CO2,RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)7天,鋪成單層,用不同濃度TNF-α(分別為0、10、30、50ng/mL)繼續(xù)孵育24小時。應(yīng)用脫氧核甘酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末

2、端標記法(TUNEL)檢測胰島細胞凋亡率;應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)檢測胰島細胞Bcl-2和BaxmRNA表達水平的變化。
　　結(jié)果:10ng/mLTNF-α組胰島細胞凋亡數(shù)與對照組比較無顯著差異(P>0.05),30ng/mL和50ng/mLTNF-α組胰島細胞凋亡數(shù)與對照組比較顯著增加(P<0.05)。10ng/mLTNF-α能增加Bcl-2mRNA表達水平,而30ng/mL和50ng/mLTNF-α能顯著

3、降低 Bcl-2mRNA表達水平。10ng/mL、30ng/mL及50ng/mLTNF-α均能使BaxmRNA表達水平增加。
　　結(jié)論:
　　(1) TNF-α可呈濃度依賴性誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的胰島細胞凋亡。
　　(2)30ng/mL和50ng/mLTNF-α能降低胰島細胞Bcl-2mRNA表達水平。10ng/mL、30ng/mL和50ng/mLTNF-α均能使BaxmRNA表達水平增加。TNF-α誘導(dǎo)胰島細胞凋亡可能與胰島

4、細胞Bcl-2 mRNA表達水平降低以及BaxmRNA表達
　　第二部分:TNF-α對SD大鼠胰島細胞胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響
　　目的:探討TNF-α對體外SD大鼠胰島細胞胰島素受體底物-1(IRS-1)、胰島素受體底物-2(IRS-2)和葡萄糖轉(zhuǎn)運子-2(Glut-2)mRNA表達水平的影響。
　　方法:成年雄性SD大鼠胰腺經(jīng)膠原酶P消化,Ficoll400純化后獲得胰島素,在37℃,5%CO2 RPMI1640培養(yǎng)液

5、培養(yǎng)7天,鋪成單層后,加入不同濃度TNF-α(分別為0、10、30、50ng/mL)繼續(xù)孵育24小時。應(yīng)用放免法測定上清液胰島素含量;采用 RT-PCR檢測IRS-1、IRS-2及Glut-2mRNA表達水平的變化。
　　結(jié)果:10ng/mL、30ng/mL及50ng/mL TNF-α均能抑制在基礎(chǔ)狀態(tài)及高糖刺激下胰島胰島素分泌。10ng/mLTNF-α對胰島細胞IRS-1、IRS-2mRNA表達水平與對照組相比無顯著差異(P>0

6、.05)。30ng/mL和50ng/mLTNF-α能顯著降低胰島細胞IRS-1和IRS-2mRNA表達水平。10ng/mL、30 ng/mL及50ng/mL TNF-α均能降低胰島細胞Glut-2mRNA表達水平,呈劑量依賴關(guān)系。
　　結(jié)論:
　　(1)不同濃度TNF-α(10ng/mL,30ng/mL和50ng/mL)抑制胰島細胞基礎(chǔ)狀態(tài)和高糖狀態(tài)下胰島素分泌,這可能與TNF-α降低胰島細胞Glut-2mRNA表達水平有關(guān)