1、目的： 比較不同類型斜視眼外肌超微結(jié)構(gòu)變化的異同，研究這種變化與斜視眼外肌離子水平變化之間的關(guān)系，探討不同類型斜視的發(fā)病機(jī)制。 材料與方法： 1.眼外肌超微結(jié)構(gòu)觀察 正常人眼外肌標(biāo)本5例，取自山東省眼庫。其中內(nèi)直肌標(biāo)本2例，外直肌標(biāo)本2例，上直肌標(biāo)本1例；斜視眼外肌標(biāo)本35例，取自我院行斜視矯正手術(shù)的患者。其中，共同性內(nèi)斜視9例(含知覺性內(nèi)斜視4例)，共同性外斜視22例(含知覺性外斜視6例)，麻痹性斜視3

2、例，先天性眼外肌纖維化1例。 斜視組眼外肌標(biāo)本于斜視矯正術(shù)中留取，去除手術(shù)中損傷到的部位以及肌肉表面的結(jié)締組織。迅速將取下的眼外肌固定，常規(guī)脫水、浸透、包埋、2.0μm半薄切片Toluidineblue染色定位后，制作110nm超薄切片，醋酸雙氧鈾和枸櫞酸鉛雙重染色后，透射電子顯微鏡下觀察眼外肌超微結(jié)構(gòu)的改變。 2.能量分散型X線顯微分析法測(cè)定斜視患者眼外肌內(nèi)各種元素的含量 斜視眼外肌標(biāo)本于斜視矯正術(shù)中留取，其中

3、包括共同性內(nèi)斜視標(biāo)本8例(含知覺性內(nèi)斜視4例)，共同性外斜視標(biāo)本10例(含知覺性外斜視3例)。取下的眼外肌標(biāo)本立即使用O.C.T包埋(Tissue-TekO.C.TCompound4583)，-80℃冷凍保存。行5μm冰凍切片，掃描電鏡下進(jìn)行檢測(cè)肌肉標(biāo)本的初步定位后，使用能量分散型X線顯微分析法測(cè)定肌肉內(nèi)各種元素的含量。 3.免疫組織化學(xué)方法測(cè)定斜視患者眼外肌內(nèi)的μ-calpain(calpainⅠ)含量 斜視眼外肌標(biāo)本

4、于斜視矯正術(shù)中留取，其中包括共同性內(nèi)斜視的外直肌標(biāo)本5例，共同性外斜視的內(nèi)直肌標(biāo)本11例(含知覺性外斜2例)。先天性上斜肌麻痹患者的下斜肌標(biāo)本3例。眼外肌標(biāo)本行常規(guī)的固定、水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋，0.4μm切片。采用Masson三色染色法觀察標(biāo)本肌原纖維和膠原纖維的分布情況。使用SABC法測(cè)定斜視患者眼外肌內(nèi)μ-calpain的含量(一抗選用兔抗人calpainⅠ)，并行DAB染色、觀察。 結(jié)果： 1.眼外肌的超微

5、結(jié)構(gòu)觀察和比較 (1)正常人眼外肌 正常眼外肌肌纖維排列整齊，明、暗帶相間，Z線平直清晰，肌絲緊密的排列成梭形，肌原纖維間可見大量線粒體。正常人內(nèi)直肌與外直肌相比，線粒體多呈圓形，大小更加均一，內(nèi)容物更致密。而外直肌的Z線、M線等橫紋結(jié)構(gòu)較內(nèi)直肌更清晰。 (2)不同類型斜視患者眼外肌 1)共同性外斜視患者的內(nèi)直肌 共同性外斜視患者的內(nèi)直肌無論病程長(zhǎng)短、斜視程度的輕重，都?xì)埩粲袡M紋結(jié)構(gòu)；Z線變得迂曲

6、、模糊；肌絲排列疏松、纖細(xì)；線粒體明顯減少；肌漿網(wǎng)擴(kuò)張。其中，知覺性外斜視患者的內(nèi)直肌與原發(fā)性共同性外斜視患者的內(nèi)直肌相比較，知覺性者肌肉成分更少，殘留的肌肉組織形態(tài)變化更嚴(yán)重。 2)共同性內(nèi)斜視患者的外直肌 共同性內(nèi)斜視患者的外直肌，肌纖維成分消失；代之為膠原纖維，而且排列紊亂；這種新生的膠原纖維在減弱側(cè)和增強(qiáng)側(cè)其超微形態(tài)學(xué)存在差異，即增強(qiáng)側(cè)的膠原纖維排列致密，減弱側(cè)纖維排列疏松且增粗。其中，知覺性內(nèi)斜視患者的外直肌與

7、原發(fā)性共同性內(nèi)斜視患者的外直肌相比較，兩者在形態(tài)學(xué)上并未見明顯差異。 3)麻痹性斜視患者的眼外肌 麻痹性斜視患者的拮抗側(cè)肌肉形態(tài)基本正常；麻痹側(cè)的肌肉改變基本與共同性斜視患者的眼外肌病變相一致。 4)先天性眼外肌纖維化患者的眼外肌 先天性眼外肌纖維化的患者內(nèi)、外直肌肌肉成分均消失，代之以排列緊密、方向一致的膠原纖維。 2.能量分散型X線顯微分析法測(cè)定斜視患者眼外肌中各種元素的含量 原發(fā)性共

8、同性內(nèi)斜視、知覺性內(nèi)斜視、原發(fā)性共同性外斜視與知覺性外斜視4個(gè)組中，斜視患者眼外肌各個(gè)元素含量不同，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P≤0.05)。 3.免疫組織化學(xué)方法測(cè)定斜視患者眼外肌μ-calpain(calpainⅠ)含量 Masson三色染色顯示肌原纖維呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色。 對(duì)照Masson三色染色結(jié)果行免疫組織化學(xué)染色，先天性上斜肌麻痹的下斜肌組織中的肌原纖維未見μ-calpain表達(dá)；共同性外斜視的內(nèi)直肌標(biāo)本中