1、病毒是一種導(dǎo)致全球發(fā)病率和死亡率持續(xù)升高的病原體?？焖凫`敏的檢測(cè)系統(tǒng)加高效的疫苗能防止病毒感染和傳播。然而目前已有的相關(guān)技術(shù)存在許多缺陷。隨著全球總?cè)丝跀?shù)量和移民數(shù)量的不斷增長(zhǎng)，對(duì)于病毒的檢測(cè)手段和疫苗提出了更高的要求。納米材料包括了具有非常獨(dú)特和重要特性的一系列納米尺度的物質(zhì)，稱(chēng)為納米結(jié)構(gòu)。其中金納米結(jié)構(gòu)是研究得最多的具有獨(dú)特表面等離子體特性的一類(lèi)納米結(jié)構(gòu)。由于它們出色的生物相容性和穩(wěn)定性，一些金納米結(jié)構(gòu)在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用潛能正在被開(kāi)

2、發(fā)，它們是病毒檢測(cè)和疫苗研發(fā)中大有希望的候選材料。本論文主要通過(guò)下列兩方面的研究來(lái)評(píng)估其在病毒檢測(cè)和疫苗研發(fā)中的作用:
　　1.聯(lián)合納米組件和等離子體的共振傳感器技術(shù)用于檢測(cè)乙型肝炎病毒。這一技術(shù)主要是建立了一種新型的基于聯(lián)合納米組件和等離子體的共振傳感器，共振傳感器主要由一個(gè)核心元件和多個(gè)帽狀生物納米配體組成。每個(gè)帽狀配體是由金納米粒子和乙肝病毒表面抗原preS2的一段短肽偶聯(lián)而成;而核心元件是由綠色(3 nm)量子點(diǎn)上結(jié)合多個(gè)

3、能特異性識(shí)別preS2短肽的Fab片段而組成的。由于核心元件上的Fab片段可以特異性結(jié)合帽狀配體上的preS2短肽，兩者形成了核心元件-帽狀配體納米組件復(fù)合體。當(dāng)反應(yīng)體系中有乙肝病毒存在時(shí)，核心元件上的Fab片段會(huì)競(jìng)爭(zhēng)性與乙肝病毒preS2短肽結(jié)合，從而破壞核心元件-帽狀配體納米組件復(fù)合體的形成。用多種技術(shù)（如紫外可見(jiàn)吸收光譜術(shù)、透射電子顯微鏡術(shù)、動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)、Zeta電位分析法、傅里葉變換紅外光譜術(shù)、能量色散X射線分析術(shù)、熒光光譜術(shù)

4、、瓊脂糖凝膠電泳）均證實(shí)了核心元件、帽狀配體及其上偶聯(lián)的傳感分子以正確的形式（如單獨(dú)存在或形成復(fù)合體）和結(jié)構(gòu)存在。通過(guò)比較反應(yīng)體系中加入的乙肝病毒表面抗原和完整的乙肝病毒顆粒，評(píng)估了核心元件-帽狀配體納米組件復(fù)合體用于檢測(cè)乙肝病毒的靈敏度和特異性，也進(jìn)一步分析了納米組件復(fù)合體的動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果表明，我們首創(chuàng)的聯(lián)合納米組件和等離子體的共振傳感器技術(shù)是一種快速和高靈敏度的病毒檢測(cè)技術(shù)，可以檢測(cè)到低至1-50個(gè)病毒粒子/微升（即10-18摩爾

5、/升）的水平。
　　2.納米等離子增強(qiáng)DNA疫苗遞送效率用于預(yù)防丙型肝炎病毒。該方法研制了一種新型的基于納米技術(shù)，提高肌注DNA疫苗的遞送效率，用于預(yù)防丙型肝炎病毒。這種新型的遞送系統(tǒng)通過(guò)在遞送DNA疫苗的鄰近部位局部注射金納米結(jié)構(gòu)，并施加幾個(gè)時(shí)間控制電脈沖而達(dá)成。我們制備了兩種特異性針對(duì)丙型肝炎病毒的DNA疫苗質(zhì)粒，分別稱(chēng)為pVAX1核心與pVAX1-NS3，另又制備了不同大?。?、50與100 nm）的金納米結(jié)構(gòu)。上述制備物的

6、理化特性用紫外可見(jiàn)吸收光譜術(shù)、透射電子顯微鏡術(shù)、動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)、Zeta電位分析法、傅里葉變換紅外光譜術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳等技術(shù)進(jìn)行了分析驗(yàn)證。對(duì)所開(kāi)發(fā)的單一丙型肝炎病毒DNA質(zhì)粒及其組合分別進(jìn)行了測(cè)試。另一方面，在不同的小鼠組測(cè)試了金納米結(jié)構(gòu)與pVAX1核心聯(lián)合給藥的效果。結(jié)果清楚地表明金納米粒子即使在很低濃度時(shí)也具有提高試驗(yàn)動(dòng)物免疫反應(yīng)、增強(qiáng)特異性抗體形成的能力。納米顆粒的大小對(duì)特異性抗體形成的水平影響甚微，而對(duì)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)卻有