1、人CD155 分子最先由Bernhardt 等人于1989 年發(fā)現(xiàn)，該分子能夠介導(dǎo)脊髓灰質(zhì)炎病毒（poliovirus，PV）入侵機體，引起脊髓灰質(zhì)炎，因此命名為PVR（poliovirus receptor）。免疫球蛋白超家族成員（IgSF）CD155 屬于黏附分子中的Nectin 家族，參與細胞的黏附和黏附連接（Ajs）的形成，并且在介導(dǎo)惡性腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。因CD155 同Nectins 的差別，2003 年，Taka

2、i 等人將CD155 命名為Necl-5（Nectin like molecule-5），隨后的研究發(fā)現(xiàn)該分子還與胚胎期神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育有關(guān)。CD155 在人多種正常細胞上低水平表達，而在多種腫瘤細胞上高表達。最近研究表明，CD155 為CD226 的配體，CD155 與CD226 分子的相互作用介導(dǎo)了NK 細胞殺傷腫瘤的作用，并且成為NK 細胞殺傷腫瘤的研究熱點之一，備受關(guān)注。作為黏附分子和免疫調(diào)節(jié)膜分子，該分子存在著可溶型形式（sCD

3、155），可能在調(diào)節(jié)病毒入侵、細胞黏附和腫瘤的免疫監(jiān)視中起到重要作用。以往研究發(fā)現(xiàn)許多可溶型膜分子與一些疾病的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，產(chǎn)生機制可以是通過細胞直接分泌，也可以由一些蛋白酶水解跨膜分子的胞膜外區(qū)，使其脫落形成。而sCD155 的產(chǎn)生機制和功能至今尚無確切定論。 本實驗首先采用間接免疫熒光染色和FCM分析了人多種細胞系的CD155表達。CD155分子在細胞系上的表達分布有著一定的規(guī)律性：不表達于人B細胞系、NK 細胞系和單核細

4、胞系；而在T細胞系和巨核細胞系有表達，在內(nèi)皮細胞系、上皮細胞系、上皮細胞來源的癌細胞系、膠質(zhì)瘤細胞系和黑色素瘤細胞系上均有高水平表達。 采用本室制備的10株抗CD155胞膜外區(qū)單克隆抗體（mAb），純化后標(biāo)記辣根過氧化物酶（HRP），通過競爭ELISA法確定了這10株mAbs識別CD155胞膜外區(qū)的3 組表位，篩選出夾心ELISA最佳包被和檢測抗體分別為FMU-CD155.2和HRP/FMU-CD155.10，建立了檢測sCD1

5、55的夾心ELISA方法，敏感性為200ng/L，具有良好的穩(wěn)定性。利用此夾心ELISA方法對正常人和腫瘤病人血清中的sCD155進行了檢測，正常人的血清sCD155濃度范圍為1.426～6.549μg/L（中位數(shù)2.529μg/L），部分腫瘤（白血病、淋巴瘤、胰腺腫瘤、乳腺癌和肺癌）病人血清中的sCD155水平低于正常人，其余腫瘤病人血清中的sCD155水平與正常人無顯著差異。 采用K562 細胞為探討sCD155 產(chǎn)生機制的

6、細胞模型，以不同蛋白酶抑制劑處理K562 細胞，用PMA 刺激K562 細胞不同時間，有的實驗加入絲氨酸蛋白酶抑制劑AEBSF 和半胱氨酸蛋白酶抑制劑NEM，用間接免疫熒光染色及FCM 分析膜型CD155（mCD155）表達，同時用夾心ELISA 法檢測細胞培養(yǎng)上清中sCD155 水平。結(jié)果表明靜止的K562 細胞mCD155 表達的陽性率約為15.7％。5mM AEBSF 或0.2mM NEM 處理細胞6h，mCD155 表達陽性率均

7、顯著增加，分別上升到96.1％和54.1％，并以時間和劑量依賴方式調(diào)節(jié)靜止細胞mCD155 的表達。PMA 刺激K562 細胞可同時增加mCD155和sCD155 的表達，而加入AEBSF 和NEM 的細胞mCD155 表達均有增加，PMA+AEBSF 組較PMA+NEM 組mCD155 上升幅度大；同時加入蛋白酶抑制劑AEBSF 或NEM 后，細胞培養(yǎng)上清中sCD155 的濃度均明顯下降。而其他蛋白酶抑制劑對K562 細胞mCD155