1、為探討低濃度辛硫磷農(nóng)藥對肝臟的慢性毒性作用及其機(jī)理，本研究通過觀察大鼠肝臟病理組織與超微結(jié)構(gòu)改變及檢測血漿、肝臟ChE、抗氧化物酶和脂質(zhì)過氧化指標(biāo)，研究了辛硫磷農(nóng)藥慢性灌胃染毒條件下對大鼠肝臟的氧化損傷作用；并進(jìn)行了原代培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞的染毒試驗(yàn)，通過掃描電鏡、熒光顯微鏡下觀察，Annexin-V-FITC和PI雙標(biāo)記流式細(xì)胞儀測定凋亡率，雙氫羅丹明標(biāo)記細(xì)胞、流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)等方法，探討了辛硫磷對大鼠肝臟的毒性作用、致

2、細(xì)胞凋亡作用以及ROS在辛硫磷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的作用。 結(jié)果表明，辛硫磷慢性染毒，大鼠血漿和肝臟中ChE活性均顯著降低，但沒有出現(xiàn)明顯的臨床中毒癥狀，推測中毒癥狀的出現(xiàn)不僅與血漿ChE活性降低程度有關(guān)，更主要與ChE降低速度有關(guān)。大鼠肝臟的病變程度隨著染毒劑量的增加和染毒時間的延長有加重趨勢。30μmol/kg劑量染毒15d，血漿和肝臟SOD、GSH-Px活性及MDA含量均無明顯變化，這也進(jìn)一步說明辛硫磷是一種短效型低毒殺蟲劑對人

3、畜的毒性較低。但是隨著染毒時間的延長，染毒30d后，肝臟抗氧化酶活性升高和MDA濃度升高，血漿抗氧化酶活性降低，是否表明肝臟的抗氧化能力代償性增強(qiáng)，有待進(jìn)一步探討。300μmol/kg劑量的辛硫磷染毒15d，血漿SOD、GSH-Px活性降低，MDA含量明顯上升，但肝臟SOD、GSH-Px活性升高。持續(xù)染毒30d時，血漿和肝臟SOD、GSH-Px活性均明顯下降，MDA含量極顯著升高(P<0.01)，表明辛硫磷農(nóng)藥持續(xù)染毒后，不僅可引起大鼠

4、機(jī)體氧化應(yīng)激，而且可以通過誘導(dǎo)肝細(xì)胞發(fā)生脂質(zhì)過氧化造成肝臟結(jié)構(gòu)的損傷。 本試驗(yàn)中30μmol/L 辛硫磷對體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞持續(xù)染毒24h，掃描電鏡下以及吖啶橙染色后熒光顯微鏡下都觀察到凋亡細(xì)胞，證明了低濃度的辛硫磷可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡。不同劑量的辛硫磷對原代培養(yǎng)的肝細(xì)胞染毒，肝細(xì)胞染毒12h，100μmol/L 劑量組死亡率極顯著增加 (P<0.01)、300μmol/L劑量組死亡率達(dá)到3.01％。染毒24h，隨著染毒劑量的增大，

5、細(xì)胞死亡率呈明顯的上升趨勢，差異均極顯著(P<0.01)，300μmol/L劑量組死亡率已高達(dá)14.28％。說明辛硫磷農(nóng)藥對肝細(xì)胞具有直接的毒性作用，而且細(xì)胞死亡率隨染毒劑量增大和染毒時間延長呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，表明辛硫磷作用劑量的增加或作用時間的延長，均可增加對細(xì)胞的毒性損傷。本試驗(yàn)測得各染毒組大鼠肝細(xì)胞隨染毒劑量的增大和染毒時間延長，細(xì)胞凋亡率增大，與對照組比較，30μmol/L 染毒12h凋亡率顯著增加(P<0.05)，100

6、μmol/L 劑量組凋亡率極顯著增加(P<0.01)，并且300μmol/L 劑量組細(xì)胞凋亡率達(dá)到最大3.93％；染毒24h后，與對照組相比，各染毒組細(xì)胞凋亡率極顯著增加(300μmol/L 劑量組除外)，100μmol/L 劑量組細(xì)胞凋亡率達(dá)到最大7.53％。說明低濃度的辛硫磷農(nóng)藥可以誘導(dǎo)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡。本研究發(fā)現(xiàn)隨著辛硫磷濃度的升高，肝細(xì)胞內(nèi)ROS水平逐漸升高，細(xì)胞凋亡率與細(xì)胞內(nèi)ROS水平呈正相關(guān)。提示在辛硫磷農(nóng)藥致大鼠肝細(xì)胞凋亡過