1、目的：侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的兩個(gè)重要生物學(xué)特性，是一個(gè)極其復(fù)雜的多因素、多步驟過(guò)程。該過(guò)程受瘤細(xì)胞之間的粘附作用、對(duì)周?chē)?xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解能力以及瘤細(xì)胞遷移等因素影響。S100A4蛋白是一種鈣離子結(jié)合蛋白，通過(guò)鈣離子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)、細(xì)胞增殖分化、細(xì)胞粘附運(yùn)動(dòng)、降解和重塑細(xì)胞外基質(zhì)及細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用。MMP-2是基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員之一，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向周?chē)M織擴(kuò)散，從而對(duì)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移

2、產(chǎn)生影響。TIMP-2是已知的4種金屬蛋白酶組織抑制劑之一，可以1：1的非共價(jià)鍵形式與MMP-2結(jié)合，特異性抑制MMP-2活性，MMP-2：TIMP-2比例失調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜降解，是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟之一。 結(jié)直腸癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)影響結(jié)直腸癌侵襲和轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素的研究日益深入。本研究擬采用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白一過(guò)氧化物酶法(Streptavidin Peroxidase，S-P法)在

3、蛋白水平聯(lián)合檢測(cè)結(jié)直腸癌中S100A4、MMP-2和TIMP-2的表達(dá)情況，分析其表達(dá)與結(jié)直腸癌生物學(xué)行為之間的關(guān)系，探討利用S100A4、MMP-2和TIMP-2作為分子標(biāo)記物評(píng)估腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移潛能的可能性，為進(jìn)一步開(kāi)展結(jié)直腸癌的研究和臨床治療提供病理學(xué)依據(jù)。 方法：本研究選擇臨沂市人民醫(yī)院2004年1月～2005年1月期間行手術(shù)切除并經(jīng)病理診斷確診的結(jié)直腸癌患者68例，收集病理標(biāo)本的存檔蠟塊，同時(shí)選取20例正常結(jié)直腸粘膜組織

4、作為對(duì)照。每個(gè)蠟塊進(jìn)行連續(xù)切片4張，厚5μm。其中一張切片進(jìn)行HE染色，常規(guī)病理觀察，另三張切片應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法(S—P法)進(jìn)行S100A4、MMP-2和TIMP-2表達(dá)水平檢測(cè)。分析S100A4、MMP-2和TIMP-2在結(jié)直腸癌組織與正常結(jié)直腸粘膜組織中表達(dá)的差異，與結(jié)直腸癌患者年齡、性別、腫瘤部位、大體類(lèi)型、組織學(xué)類(lèi)型、分化程度、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)資料應(yīng)用SPSS 13.0 for windows統(tǒng)計(jì)軟件包

5、對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行X<'2>檢驗(yàn)、Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)、Spearman等級(jí)相關(guān)分析。 結(jié)果：1.S100A4蛋白在20例正常結(jié)直腸粘膜組織中未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)(0﹪)，在68例癌組織中有42例(61.8﹪)呈陽(yáng)性表達(dá)，其中弱陽(yáng)性18例(26.5﹪)、陽(yáng)性15例(22.1﹪)、強(qiáng)陽(yáng)性9例(13.2﹪)，兩者統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.003)；S100A4蛋白的表達(dá)在結(jié)直腸癌不同年齡、性別、腫瘤部位、大體類(lèi)型、組織學(xué)類(lèi)型、分化

6、程度中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在不同Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異明顯(P<0.05)，且分期越晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)越高。2.MMP-2在20例正常結(jié)直腸粘膜組織中有4例(20﹪)呈陽(yáng)性表達(dá)，在68例癌組織中有58例(85.3﹪)呈陽(yáng)性表達(dá)，其中弱陽(yáng)性20例(29.4﹪)、陽(yáng)性27例(39.7﹪)、強(qiáng)陽(yáng)性11例(16.2﹪)，兩者統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著(P=0.001)：MMP-2的表達(dá)在結(jié)直腸癌不同年齡、性別、腫瘤部位、大體

7、類(lèi)型、組織學(xué)類(lèi)型中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在不同分化程度、Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)中差異明顯p<0.05)，且分化越差、分期越晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)越高。3.TIMP-2在20例正常結(jié)直腸粘膜組織中有8例(40﹪)呈陽(yáng)性表達(dá)，在68例癌組織中有40例(58.8﹪)呈陽(yáng)性表達(dá)，其中弱陽(yáng)性15例(22.1﹪)、陽(yáng)性19例(27.9﹪)、強(qiáng)陽(yáng)性6例(8.8﹪)，兩者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.609)，但TIMP-2中一強(qiáng)度表達(dá)在

8、兩者中差異顯著(P<0.05)。TIMP-2的表達(dá)在結(jié)直腸癌不同年齡、性別、腫瘤部位、大體類(lèi)型、組織學(xué)類(lèi)型、分化程度中差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；在不同Dukes分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移差異明顯(P<0.05)，且分期越晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者表達(dá)降低。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，結(jié)直腸癌中S100A4蛋白與MMP-2表達(dá)呈正相關(guān)(r=0532,P<0.01)，MMP-2與TIMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.425,P<0.01)，S100A4蛋白

9、與TIMP-2表達(dá)無(wú)相關(guān)(r=0.095,P>0.05)。 結(jié)論：1.S100A4蛋白在正常結(jié)直腸粘膜組織中無(wú)表達(dá)，在結(jié)直腸癌組織中有不同程度的表達(dá)；MMP-2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常結(jié)直腸粘膜；TIMP-2在癌組織和正常結(jié)直腸粘膜組織中均有不同程度的陽(yáng)性表達(dá);但中一強(qiáng)度表達(dá)前者明顯高于后者。2.結(jié)直腸癌中S100A4蛋白、MMP-2及TIMP-2表達(dá)在不同Dukes分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中差異明顯，且分期越晚、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

10、移者S100A4蛋白與MMP-2表達(dá)越高，而TIMP-2表達(dá)呈降低趨勢(shì)。S100A4蛋白和MMP-2高表達(dá)與TIMP-2低表達(dá)在結(jié)直腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移中可能有一定協(xié)同作用。3．結(jié)直腸癌中S100A4蛋白與MMP-2的表達(dá)呈正相關(guān)，MMP-2與TIMP-2表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，S100A4蛋白可能參與介導(dǎo)了MMP-2的表達(dá)，TIMP-2則可能反饋性抑制了MMP-2的表達(dá)。4．應(yīng)用免疫組化S-P法聯(lián)合檢測(cè)S100A4，MMP-2，TIMP-2表達(dá)情況