1、目的：肝臟葡萄糖-6-磷酸酶是控制機體葡萄糖穩(wěn)態(tài)的一個重要的酶，由于它是催化機體葡萄糖合成的最后一步生化反應(yīng)，如水解6-磷酸葡萄糖為葡萄糖和磷酸。事實上，2型糖尿病的高血糖同肝臟胰島素抵抗所致的肝糖過度輸出有著緊密相關(guān)。因此葡萄糖-6-磷酸酶是糖尿病治療的一個潛在的靶點。本實驗旨在研究該酶的幾種抑制劑對該酶的基因表達的影響作用，為進一步探討利用該酶的抑制劑作為糖尿病的治療手段提供理論依據(jù)和實驗基礎(chǔ)。 方法：以膠原酶原位灌注消化的

2、方法分離制備大鼠肝細胞，用含10％FBS及牛胰島素的1640培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)．細胞貼壁后，換用新鮮的含不同濃度的葡萄糖和葡萄糖-6-磷酸酶的不同抑制劑而不含血清和胰島素的培養(yǎng)液培養(yǎng)4小時。然后提取細胞總RNA，采用半定量RT-PCR的方法測定P36和P46的mRNA的豐度。 結(jié)果： 1．采用以膠原酶原位灌注消化的方法分離制備的肝細胞產(chǎn)率及活率均很高。細胞的活率可達到95％以上。 2．大鼠肝細胞在高糖培養(yǎng)液（25

3、mMGLu）中培養(yǎng)4小時后，其催化亞基和轉(zhuǎn)運亞基mRNA均明顯增加。（P<0．05） 3．采用轉(zhuǎn)運亞基特異的抑制劑氯原酸（5mM）與高糖培養(yǎng)液聯(lián)合培養(yǎng)肝細胞4小時后，肝細胞葡萄糖-6-磷酸酶的催化亞基和轉(zhuǎn)運亞基的mRNA的豐度均下降。（P<0．05） 4．利用糖原合成酶激酶3抑制劑氯化鋰（10mM、20mM）培養(yǎng)肝細胞也可達到同樣的抑制效果。 結(jié)論：利用膠原酶消化制備的肝細胞具有較好的產(chǎn)率和活率。體外高糖培養(yǎng)細胞