重組CFTR多抗原性肽的構(gòu)建及其抗體制備.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)表達(dá)量與人類生殖健康密切相關(guān),建立簡便易行又經(jīng)濟(jì)的CFTR蛋白定量檢測試劑盒對于臨床生殖檢驗(yàn)診斷、精子庫精子篩查及科學(xué)研究具有重要意義。但國內(nèi)至今尚無CFTR定量檢測試劑盒。CFTR特異性抗體的獲得是建立試劑盒的基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)選取市售單抗識別的CFTR蛋白N端2個抗原性肽(P125-36和p2103-117)和C端1個抗原性肽(p31387-1480)為CFTR-3P分子的抗原肽段并合成其編碼基因,構(gòu)

2、建含CFTR-3P編碼基因的重組表達(dá)質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21菌株獲得工程菌(BL21/pSY621-ZPCP),通過熱誘導(dǎo)表達(dá)工程菌獲得分子量約為17kDa的CFTR-3P蛋白。用純化的CFTR-3P蛋白免疫新西蘭雄白兔獲得CFTR-3P抗體并檢測抗體滴度高達(dá)1∶51200,在蛋白印跡試驗(yàn)中三只免疫兔混合血清分別能識別重組GST188-P1、-P2和P3-11443-1457融合蛋白。用1#和3#兔抗重組CFTR-3P抗血清進(jìn)一步鑒定

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