1、目的:觀察多西環(huán)素對哮喘大鼠MMP-9/TIMP-1平衡及TGF-β1的影響。建立大鼠哮喘模型，通過觀察多西環(huán)素干預(yù)后肺組織中MMP-9、TIMP-1表達(dá)及血清中TGF-β1濃度的變化，探討多西環(huán)素對哮喘氣道重塑和氣道炎癥的影響及其作用機(jī)制，為哮喘的臨床治療提供新的途徑。
　　 方法:SD健康雄性大鼠33只，6周齡，體重在50-100g之間，隨機(jī)分為3組，即正常對照組、哮喘模型組、多西環(huán)素干預(yù)組，每組11只。哮喘模型組和多西環(huán)素

2、干預(yù)組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)第1、8天腹腔注射卵清蛋白100mg和氫氧化鋁100mg（混于0.9％氯化鈉溶液中）配成的混合溶液2ml進(jìn)行致敏。第15天起將大鼠置于自制的非完全密閉的霧化箱中吸入卵清蛋白溶液進(jìn)行激發(fā)試驗(yàn)，每次30分鐘，隔日一次，共激發(fā)20次。卵蛋白溶液濃度按照1％、1.5％、2％、2.5％、3％依次遞增，每4次激發(fā)后調(diào)整一次。對照組以等量生理鹽水替代卵蛋白激發(fā)，方法同上。多西環(huán)素干預(yù)組在每次激發(fā)前0.5小時(shí)灌胃給藥，劑量為30mg

3、/kg。末次激發(fā)24小時(shí)后1％戊巴比妥鈉麻醉、處死大鼠，取各組大鼠支氣管肺泡灌洗液、血清及肺組織。測定肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的數(shù)量，ELISA法檢測血清中TGF-β1濃度，免疫組化檢測各組大鼠肺組織中MMP-9、TIMP-1的表達(dá)。部分肺組織行蘇木精—伊紅染色，觀察其形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)測定肺組織支氣管基底膜周徑、總管壁面積、平滑肌面積，應(yīng)用圖像分析軟件測定MMP-9、TIMP-1的相對表

4、達(dá)強(qiáng)度。
　　 結(jié)果:
　　 1、哮喘模型的建立
　　 應(yīng)用卵蛋白致敏和反復(fù)激發(fā)的方法成功建立了大鼠哮喘模型。激發(fā)過程中哮喘組大鼠可有呼吸急促、煩躁不安等表現(xiàn);實(shí)驗(yàn)期間出現(xiàn)精神萎靡、反應(yīng)遲鈍、體重減輕等情況。
　　 2、肺泡灌洗液細(xì)胞計(jì)數(shù)（106/L）及分類哮喘組細(xì)胞總數(shù)（35.53±7.06）明顯高于正常對照組（9.42±3.67）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預(yù)組（14.65±5.81）(P＜0.01)

5、;多西環(huán)素組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=64.840，P＜0.01）。
　　 哮喘組嗜酸性粒細(xì)胞（4.83±0.65）明顯高于正常對照組（1.24±0.72）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預(yù)組（2.14±0.58）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=90.598，P＜0.01）。
　　 哮喘組

6、中性粒細(xì)胞（1.12±0.30）明顯高于正常對照組（0.23±0.14）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預(yù)組（0.59±0.19）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=45.007，P＜0.01)。
　　 哮喘組淋巴細(xì)胞（2.63±0.33）明顯高于正常對照組（1.18±0.38）(P＜0.05)和多西環(huán)素干預(yù)組（2.05±0.58）（P＜0.01）;多西環(huán)素

7、組較正常對照組亦有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=90.598，P＜0.01)。
　　 3、氣道管壁厚度(μm2/μm)、平滑肌厚度(μm2/μm)
　　 分析比較各組大鼠氣道管壁厚度、平滑肌厚度結(jié)果顯示:哮喘組（109.95±13.85）、（56.94±8.23），顯著高于多西環(huán)素干預(yù)組（86.37±5.85）、（40.64±4.53）（P＜0.01，P＜0.01）和正常對照組（65

8、.47±7.22）、（20.09±6.09）(P＜0.01，P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組亦明顯升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=58.737，P＜0.01)、(F=89.782，P＜0.01)。
　　 4、MMP-9、TIMP-1的表達(dá)及MMP-9/TIMP-1
　　 MMP-9:哮喘組（0.52±0.06）明顯高于正常對照組（0.24±0.06）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預(yù)組

9、（0.39±0.06）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組仍有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=57.966，P＜0.01）。
　　 TIMP-1:哮喘組（0.62±0.06）明顯高于正常對照組（0.24±0.06）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預(yù)組（0.41±0.07）(P＜0.01);多西環(huán)素組較正常對照組仍有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=102.49

10、6，P＜0.01)。
　　 MMP-9/TIMP-1:哮喘組（0.83±0.04）低于正常對照組（1.02±0.04）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預(yù)組(0.94±0.06)(P＜0.01);多西環(huán)素組亦低于正常對照組(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=41.839，P＜0.01)。
　　 5、各組大鼠血清TGF-β1的檢測(ng/ml)
　　 哮喘組（27.66±4.01）較正常對照組（

11、13.15±2.01）(P＜0.01)和多西環(huán)素干預(yù)組(18.39±2.88)(P＜0.01)顯著升高，多西環(huán)素組較正常對照組仍有所升高(P＜0.01);三組之間存在顯著性差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=62.632，P＜0.01)。
　　 6、相關(guān)分析研究
　　 結(jié)果顯示MMP-9與TIMP-1（r=0.93，P＜0.01）及TGF-β1(r=0.81，P＜0.01)均為正相關(guān);MMP-9與氣管壁厚度正相關(guān)(r=0.82，P

12、＜0.01);TGF-β1與平滑肌厚度正相關(guān)（r=0.79，P＜0.01），MMP-9/TIMP-1與氣管壁厚度負(fù)相關(guān)(r=-0.77，P＜0.01)。
　　 結(jié)論:多西環(huán)素可減少肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞的數(shù)量，從而減輕氣道炎癥;多西環(huán)素可下調(diào)MMP-9、TIMP-1表達(dá)及TGF-β1的濃度，從而減緩氣道重塑。通過對MMP-9/TIMP-1平衡及TGF-β1濃度的調(diào)節(jié)，多西環(huán)素減緩哮喘的氣道炎癥和氣道重塑，這成為其治療哮喘的重要機(jī)制