1、MUC1是Mucins粘蛋白中的一種，存在于正常腺管上皮及其來(lái)源的腫瘤細(xì)胞表面。它是一種大分子的糖蛋白，由多肽核芯和側(cè)枝糖鏈構(gòu)成，其多肽核芯的胞外段含有20個(gè)氨基酸的串聯(lián)重復(fù)序列(Variablenumberstandemrepeats，VNTRs)。在多種腫瘤中，MUC1異常表達(dá)，主要表現(xiàn)為表達(dá)量增高，細(xì)胞表面極性分布的改變和結(jié)構(gòu)改變等，成為免疫細(xì)胞攻擊的靶點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)MUC1核芯肽的PDTRP表位不僅能被MUC1抗體識(shí)別，而且也能被

2、CTL細(xì)胞識(shí)別和殺傷，且不受MHC的限制。由于MUC1具有上述特點(diǎn)，成為理想的抗腫瘤靶分子。本課題的目的即是開(kāi)發(fā)一種基于熱休克蛋白的針對(duì)非小細(xì)胞肺癌(Nonsmallcelllungcancer,NSCLC)的MUC1治療性疫苗。 近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，熱休克蛋白—多肽復(fù)合物可通過(guò)受體(CD91)介導(dǎo)的內(nèi)吞作用被巨噬細(xì)胞吞噬，然后經(jīng)過(guò)蛋白酶體降解，最終進(jìn)入內(nèi)源性抗原遞呈途徑，從而激活細(xì)胞免疫。我們選擇結(jié)核分支桿菌熱休克蛋白65(HSP65

3、)與鼠BP24或人BP25基因融合來(lái)作為腫瘤的治療性疫苗。它可以把BP24或BP25蛋白呈遞給MHC-I抗原呈遞途徑，進(jìn)而激活細(xì)胞免疫。 我們通過(guò)克隆得到鼠BP24和人BP25基因，構(gòu)建了HSP65-BP24-Ztag和HSP65-BP25-Ztag的pET28a表達(dá)載體，并在大腸桿菌中得到了高效表達(dá)。目的蛋白經(jīng)硫酸銨沉淀、陽(yáng)離子層析、疏水層析獲得了純度超過(guò)90％的樣品。經(jīng)純化的蛋白作為非小細(xì)胞肺癌的治療性疫苗。應(yīng)用HSP65-