1、目前，多肽蛋白類以及部分水溶性藥物臨床使用的劑型，主要是溶液型注射劑和凍干粉針。若直接口服給藥，生物利用度一般很低，臨床價(jià)值不大。而采用載體材料包裹藥物制成納米粒后口服，可以保護(hù)藥物不被胃酸和酶的破壞，并能促進(jìn)納米粒在小腸上皮細(xì)胞peyer’s斑的聚集，增加藥物在消化道的吸收量，提高了藥物的生物利用度。 本課題選用水溶性多肽類藥物，以生物相容性好的脂質(zhì)為主體材料，制備固體脂質(zhì)納米粒。采用溶劑擴(kuò)散法制備單硬脂酸甘油酯納米粒，以促黃

2、體生成激素釋放激素的類似物(LHRH-A2)為模型藥物。研究納米粒的理化性質(zhì)，以微粒粒度與zeta電位測(cè)定儀測(cè)定其粒徑分布、表面電位；高效液相法測(cè)定了藥物包封率；考察載藥納米粒的體外釋放特性；以4種不同比例的硬脂酸、油酸和單硬脂酸甘油酯，通過溶劑擴(kuò)散法制備混合脂質(zhì)納米粒，考察混合脂質(zhì)納米粒的理化性質(zhì)、包封率和體外釋放特性。 放大單硬脂酸甘油酯納米粒的處方，經(jīng)冷凍干燥法制備LHRH-A2納米粒粉劑，繪制產(chǎn)品的凍干曲線圖；以再分散后

3、納米粒粒徑為評(píng)價(jià)指標(biāo)，從泊洛沙姆、甘露醇和乳糖中篩選最佳凍干保護(hù)劑。 鯽魚口灌不同LHRH-A2劑量(25、50、100μg/kg)的單硬脂酸甘油酯納米粒，測(cè)定魚體內(nèi)的激素濃度的經(jīng)時(shí)變化，進(jìn)行納米粒的體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究；花(魚骨)魚口灌不同LHRH-A2劑量(25、50μg/kg)的脂質(zhì)納米粒和溶液對(duì)照組，進(jìn)行魚體內(nèi)的藥效學(xué)研究，以常規(guī)的腹腔注射給藥(10μg/kg)為對(duì)照，評(píng)價(jià)載藥納米粒的催產(chǎn)效率和受精率。 用水性溶劑

4、擴(kuò)散法可簡(jiǎn)便快速制備得到單硬脂酸甘油酯固體脂質(zhì)納米粒，納米粒粒徑呈單峰分布，體均粒徑432.1±133.3nm，表面電位-19.4±1.1mV。采用調(diào)節(jié)納米粒表面電位至接近于零的方法，在低轉(zhuǎn)速離心(4000r·min-1)條件下，可實(shí)現(xiàn)納米粒從分散系中的有效分離。采用HPLC測(cè)定，藥物的包封率63.4±2.3﹪。體外釋放研究結(jié)果顯示，LHRH-A2-MSLN在前8h快速釋放了納米粒所載藥物的28.4﹪，隨后每天以3.4﹪的速率持續(xù)釋放。

5、由此結(jié)果推測(cè)，一些藥物可能吸附在納米粒的表面，或者以分子形式沉淀在脂質(zhì)基質(zhì)的表面，形成釋放初期的藥物突釋現(xiàn)象；多數(shù)藥物分散在脂質(zhì)骨架中，藥物釋放速率主要受脂質(zhì)溶蝕的影響，而呈現(xiàn)緩慢與持續(xù)性的特點(diǎn)。采用單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、油酸混合脂質(zhì)處方，并不顯著影響納米粒的粒徑、表面電位和藥物的包封率。油酸的加入，可在一定程度上增加藥物的釋放。 放大單硬脂酸甘油酯納米粒處方，通過冷凍干燥法得到LHRH-A2的納米粒粉劑，繪制出樣品的凍干曲線

6、圖。納米粒懸液加不同類型、不同濃度的凍干保護(hù)劑，采用凍干粉末的再分散性研究，以再分散粒徑為評(píng)價(jià)指標(biāo)，確定0.3﹪泊洛沙姆為最佳凍干保護(hù)劑。 鯽魚體內(nèi)載藥納米粒的藥物動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果顯示，注射給藥(對(duì)照組)很快達(dá)到藥物的峰濃度，達(dá)峰時(shí)0.5h，隨后藥物濃度快速下降，24h后體內(nèi)激素水平恢復(fù)到正常值。不同劑量的口灌載藥納米粒組(試驗(yàn)組)，均有一個(gè)明顯的藥物吸收峰，達(dá)峰時(shí)間2h。魚體內(nèi)激素水平，隨著試驗(yàn)組口灌劑量的增加而升高，呈現(xiàn)一定的

7、劑量-濃度效應(yīng)。試驗(yàn)組激素恢復(fù)過程緩慢，至24h時(shí)，仍然依照給藥劑量的高低順序，維持在比較高濃度的水平上。表明通過納米粒載體技術(shù)，可體現(xiàn)多肽類藥物魚口服的明顯吸收，與注射給藥相比，具有一定的長(zhǎng)效作用。 花(魚骨)魚本身無法自行排卵，口灌不同劑量(25、50μg/kg)的LHRH-A2-MSLN藥效學(xué)研究結(jié)果表明，基于納米載體技術(shù)的LHRH-A2-MSLN，采用口灌給藥時(shí)，可產(chǎn)生比較明顯的催產(chǎn)效果。當(dāng)載藥納米粒從低劑量(25μg/

8、kg)增加到高劑量(50μg/kg)時(shí)，其催產(chǎn)率由26.7﹪增加到46.5﹪。相對(duì)于注射給藥的有效率，口灌試驗(yàn)組分別達(dá)到12.3﹪(低劑量組)和10.7﹪(高劑量組)?；旌现|(zhì)載藥納米粒(LHRH-A2-mSLN)，在口灌低劑量(25μg/kg)和高劑量(50μg/kg)時(shí)的催產(chǎn)率分別為13.3﹪和40.0﹪，分別低于等劑量的LHRH-A2-MSLN，可能與LHRH-A2-mSLN中藥物具有比較明顯的突釋有關(guān)。 采用口灌方式催產(chǎn)