1、天津醫(yī)科大學博士學位論文端粒酶和腦源性神經(jīng)生長因子共修飾骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究姓名：王志濤申請學位級別：博士專業(yè)：外科學神外指導教師：張建寧20100601天津醫(yī)科大學博士學位論文胞分化，提示其具有多向分化潛能，證實rBMSCs培養(yǎng)成功。第二部分研究是通過轉(zhuǎn)染pLXSN質(zhì)粒介導的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶催化亞單位(humantelomerasereversetranscriptasehTERT)來增強BMSCs端粒酶的活性，獲得TAd5一h

2、TERT調(diào)控的永生化大鼠BMSC，利用ELISA方法檢測轉(zhuǎn)染細胞的端粒酶活性。同時，通過構(gòu)建腺病毒介導的BDNF高效表達載體Ad5BDNF，將Ad5一BDNF復合體轉(zhuǎn)染至hTERTBMSC，證明了轉(zhuǎn)染BDNF的永生化BMSC在體外具有一定程度的損傷細胞修復作用，為Ad5一BDNF—BMSC的體內(nèi)實驗奠定基礎(chǔ)。第三部分研究中我們選取國際上較為普遍采用的大鼠液壓顱腦損傷模型，在152Oatm條件下制備大鼠中型顱腦創(chuàng)傷模型，同時借助于立體定向

3、細胞移植技術(shù)，將共轉(zhuǎn)染BDNF和hTERT基因的BMSCs移植到損傷腦組織區(qū)，觀察細胞移植治療后大鼠生存期變化、神經(jīng)損傷評分(neurologicseverityscore，NSS)的變化以及損傷區(qū)腦組織水腫在核磁共振成像(MRI)的變化，評價基因修飾的BMSCs在大鼠液壓顱腦創(chuàng)傷模型體內(nèi)的安全性和對TBI治療的有效性，為BDNF和BMSCs聯(lián)合治療TBI步入臨床奠定基礎(chǔ)。上述研究結(jié)果表明：大鼠BMSCs易于分離、培養(yǎng)和擴增，長期體外培

4、養(yǎng)BMSCs可出現(xiàn)過早老化和過度增殖等生物學性狀不穩(wěn)定現(xiàn)象；hTERT正以表達載體pLXSN—S—hTERT轉(zhuǎn)染至大鼠BMSC，可以使BMSC的端粒酶活性增強，促進BMSCs增殖，并保持在長期傳代培養(yǎng)過程中形狀穩(wěn)定性，是建立BMSCs永生化細胞系的安全可靠而有效的方法；Ad—BDNF—hTERT—BMSCs在體內(nèi)外可以高表達BDNF，能夠有效減少受損神經(jīng)元的的凋亡，提高腦損傷大鼠的生存率，并能促進其神經(jīng)功能的康復，為BDNF矛HBMSC