1、20世紀90年代以來，多種人類腫瘤抗原基因克隆的成功，大大推動了腫瘤免疫學(xué)理論的發(fā)展，也促進了腫瘤免疫診斷和免疫治療的應(yīng)用。由于腫瘤抗原在腫瘤診斷與治療中具有重要的靶向作用，因此尋找特異性強、基因功能明確的靶分子成為腫瘤分子生物學(xué)的研究熱點。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的提高和從細胞受體以及增殖調(diào)控的分子水平對腫瘤發(fā)病機制的進一步認識，開始了針對細胞受體、關(guān)鍵基因和調(diào)控分子為靶點的治療，人們稱之為“靶向治療”。這些領(lǐng)域包括具有靶向性的表皮

2、生長因子受體(EGFR)阻斷劑，針對某些特定細胞標志物的單克隆抗體，針對某些癌基因和癌的細胞遺傳學(xué)標志的藥物，抗腫瘤血管生成的藥物，抗腫瘤疫苗，基因治療等等，并在不到10年的時間里有了長的進步。 乳腺癌的發(fā)生與遺傳等因素密切相關(guān)，隨著分子生物學(xué)研究的深入，人們認識到腫瘤是一種基因性疾病。近年來，乳腺癌的發(fā)病率日趨增高，在乳腺癌特異抗原標志的眾多研究中，除c-erbB-2、EGFR的特異性較高以外，一直未有新的特異性和靈敏度較高的

3、乳腺癌抗原的報道。 本課題研究針對我院實驗科制備的多株人乳腺癌單克隆抗體進行免疫學(xué)性質(zhì)的研究，并構(gòu)建了人乳腺癌細胞cDNA噬菌體表達文庫，這將為進一步利用單抗對cDNA文庫進行免疫學(xué)篩選提供了前期準備。實驗結(jié)果如下： 1.人乳腺癌單抗效價的測定及IgG亞類的鑒定 利用ELISA方法測定抗體的效價，用瓊脂雙向擴散鑒定其IgG亞類。測定的六種單克隆抗體(A6、C8、H11、E6、H6、C4)的效價分別為1:4000，

4、1:8000，1:8000，1:32000，1:1000，1:2000，其中E6的效價可以達到106。其IgG亞類分別為IgG3，IgG1，IgG3，IgG1，IgG1，IgG3。 2.抗人乳腺癌單抗(E6、H6)在各種腫瘤組織中的免疫組化研究 利用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生素蛋白.過氧化物酶(SP)法檢測3例正常人組織，48例腫瘤患者組織，其中包括乳腺、胃、結(jié)腸、肺腺癌各12例。正常組織呈陰性染色，腫瘤組織呈現(xiàn)細胞膜和細胞

5、漿陽性著色，E6陽性表達率在乳腺癌中為100％(12/12)，在腫瘤組織中綜合表達率為94％(45/48)，H6陽性表達率在乳腺癌中為92％(11/12)，在腫瘤組織中綜合表達率為83％(40/48)。 3.人乳腺癌單克隆抗體對應(yīng)抗原蛋白免疫印跡分析 從乳腺癌組織中提出抗原蛋白質(zhì)，運用抗原對應(yīng)抗體進行免疫印跡實驗，并以正常小鼠血清為蛋白標準。結(jié)果中作為蛋白標準的小鼠正常血清僅出現(xiàn)兩條條帶，其中一條為重鏈，分子量為54kD

6、，另外一條為輕鏈，分子量為27kD。蛋白樣品僅出現(xiàn)一條條帶，無非特異性條帶，通過計算其分子量為46.414kD。 4.人乳腺癌細胞cDNA噬菌體文庫的構(gòu)建及鑒定 用SMART技術(shù)，構(gòu)建了人乳腺癌細胞cDNA噬菌體文庫，從人乳腺癌細胞中分離總RNA并純化mRNA，利用經(jīng)修飾的oligo(dT)引物合成cDNA第一鏈，利用SMART核苷酸作為cDNA第一鏈在mRNA5'端延伸出去的模板，采用LD-PCR合成雙鏈cDNA，雙鏈