納米羥基磷灰石-膠原-重組人骨形成蛋白-2復合支架的制備及細胞相容性.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
   利用骨組織工程學的理論,通過成骨細胞與支架共培養(yǎng),測量細胞在材料上的增殖、分化情況,以此來評估生物支架材料的細胞相容性。
   目的:
   從細胞學角度評價復合材料納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2對成骨細胞增殖、分化的影響,了解其細胞相容性,并與同種異體骨比較,為該材料的臨床應用提供實驗依據(jù)。
   方法:
   采用改良膠原酶消化法處理新生24h內Wistar大鼠的顱蓋

2、骨,并進行成骨細胞原代培養(yǎng)。通過堿性磷酸酶染色、蘇木精.伊紅染色、鈣結節(jié)茜素紅染色、倒置相差顯微鏡對提取的成骨細胞進行觀察與鑒定。然后將培養(yǎng)狀況良好的第3代細胞與納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2支架材料體外復合培養(yǎng)。培養(yǎng)第3,6,9d后,采用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài),堿性磷酸酶活性測定法、MTT法測定支架材料對成骨細胞分化、增殖的影響。
   結果:
   1、通過原代培養(yǎng)提取的成骨細胞呈圓形懸浮于混合培養(yǎng)液

3、中,2小時后開始逐漸貼壁。培養(yǎng)3天后,顯微鏡下可見細胞呈梭形及不規(guī)則形。堿性磷酸酶染色大部分細胞(95%以上)呈陽性,經茜素紅染色可見紅色礦化結節(jié)。
   2、ALP法和MTT法:該材料對成骨細胞增殖分化效果良好,并可促進成骨作用。
   3、倒置相差顯微鏡下見納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白-2復合材料周圍聚集大量成骨細胞,并隨時間增殖。
   4、掃描電鏡觀察發(fā)現(xiàn):納米羥基磷灰石/膠原/重組人骨形成蛋白

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