1、背景：癲癇是常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性性疾病之一。其中顳葉癲癇60-70﹪發(fā)展成為難治性癲癇(Intractable epilepsy)，而且由于反復(fù)發(fā)作和長(zhǎng)期用藥的毒副作用導(dǎo)致難治性癲癇病人常并發(fā)學(xué)習(xí)記憶功能障礙，其機(jī)制的深入探討以及篩選新藥乃需采用難治性癲癇動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。 目的：本研究采用難治性癲癇大鼠模型，探討前深梨狀皮層T區(qū)的膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)免疫反應(yīng)陽性乙酰膽堿(Ach)能神經(jīng)元變化與蝎毒耐熱蛋白(Scor

2、pion Venom Heat-Resistant Protein，SVHRP)改善難治性癲癇大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶障礙的關(guān)系。 方法：50只大鼠一次頸部皮下注射驚厥劑量(10mg/kg)的KA，誘發(fā)SD大鼠出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus SE)。SE后被隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(SE+NS)和實(shí)驗(yàn)給藥組(SE+SVHRP)，并分別經(jīng)腹腔注射SVHRP(0.25mg/kg)和等容積生理鹽水連續(xù)10天。同時(shí)，另選30只正

3、常大鼠被一次給予頸部皮下注射等容積(2.0ml/kg)的生理鹽水后，亦被隨機(jī)分為兩組，分別為鹽水對(duì)照組(NS+NS)和鹽水給藥組(NS+SVHRP)，并分別經(jīng)腹腔注射SVHRP(0.25mg/kg)和等容積生理鹽水連續(xù)10天。SE后10天，上述各組動(dòng)物均被給予閾下劑量(5mg/kg)的KA，檢測(cè)該動(dòng)物是否出現(xiàn)對(duì)癲癇刺激的敏感性進(jìn)行性提高。用Morris水迷宮測(cè)定動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)記憶能力。其后用免疫組織化學(xué)方法比較各組動(dòng)物前深梨狀皮層T區(qū)C

4、hAT免疫反應(yīng)陽性的乙酰膽堿(Ach)能神經(jīng)元數(shù)目變化。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，方差分析進(jìn)行組間均數(shù)差異性比較，P<0.05為有顯著性差異。 結(jié)果： 1、行為學(xué)結(jié)果：SD大鼠(n=50)在注射驚厥劑量(10mg/kg)KA后，0-30min內(nèi)動(dòng)物出現(xiàn)凝視，濕狗樣抖動(dòng)(wet dog shake，WDS)等前驅(qū)癥狀；30-60min內(nèi)動(dòng)物出現(xiàn)1-5級(jí)癲癇發(fā)作；60-90min內(nèi)動(dòng)物反復(fù)自發(fā)出現(xiàn)4-5級(jí)癲癇發(fā)作；其后動(dòng)物

5、癲癇發(fā)作持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，間隔變短伴有大量唾液分泌，出現(xiàn)各種精神運(yùn)動(dòng)癥狀，呈現(xiàn)SE，SE后10天，用閾下劑量(5mg/kg)KA檢測(cè)動(dòng)物對(duì)癲癇刺激的敏感性。SE+Ns組有9只大鼠出現(xiàn)4-5級(jí)發(fā)作，其中5級(jí)發(fā)作5只，4級(jí)發(fā)作5支，3級(jí)發(fā)作2只；SE+SVHRP組有4只4-5級(jí)發(fā)作，中有3只出現(xiàn)5級(jí)發(fā)作；1只出現(xiàn)4級(jí)癲癇發(fā)作；2只出現(xiàn)3級(jí)發(fā)作；3只出現(xiàn)2級(jí)發(fā)作：4只出現(xiàn)1級(jí)發(fā)作；余下3只均未出現(xiàn)發(fā)作。NS+NS組和NS+SVHRP30只大鼠未出

6、現(xiàn)對(duì)癲癇刺激敏感性增強(qiáng)。經(jīng)有序變量的秩和檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)SE+NS組大鼠的癲癇發(fā)作級(jí)別明顯大于NS+NS組大鼠，差異有顯著性結(jié)(p<0.05)，提示SE誘發(fā)的難治性癲癇大鼠對(duì)癲癇刺激敏感性明顯增強(qiáng)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)SE+SVHRP組大鼠的癲癇發(fā)作級(jí)別明顯小于SE+NS組大鼠，差異有顯著性結(jié)(p<0.05)，提示SVHRP明顯抑制難治性癲癇對(duì)癲癇刺激的敏感性。 2、水迷宮結(jié)果：與實(shí)驗(yàn)給藥組、鹽水對(duì)照組、鹽水給藥組大鼠相比。實(shí)驗(yàn)組大鼠的尋找潛伏期

7、在各個(gè)時(shí)間段都明顯延長(zhǎng)，選擇性搜索策略差，穿越平臺(tái)的次數(shù)減少，減少在目標(biāo)象限(TR)而增加對(duì)側(cè)象限(OP)的游泳路徑和時(shí)間所占總路程和總時(shí)間的百分比。 3、免疫組化結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組前深梨狀皮層T區(qū)ChAT免疫反應(yīng)陽性的乙酰膽堿(Ach)能神經(jīng)元數(shù)目明顯少于實(shí)驗(yàn)給藥組、鹽水對(duì)照組、鹽水給藥組，而其它三組大鼠前深梨狀皮層T區(qū)的ChAT免疫反應(yīng)呈陽性Ach能神經(jīng)元神經(jīng)元數(shù)目無明顯區(qū)別。 結(jié)論： 1、SE誘發(fā)的難治性癲癇大鼠