1、DNA甲基化指哺乳動物基因組DNA的胞嘧啶(C)的5'位通過DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNAmethyltransferase，DNMT)介導發(fā)生的甲基化修飾反應，此反應主要發(fā)生在5'-CG-3'的DNA序列中，即CpG位點甲基化。DNA甲基化為表觀遺傳學的重要組成部分，并且是目前研究的比較成熟的部分。DNA甲基化可以影響基因表達、染色體穩(wěn)定性、X染色體轉(zhuǎn)錄沉默、基因組印跡以及染色質(zhì)濃縮，而且是可以遺傳的，但它卻并不改變基因DNA的編碼序列。D

2、NA甲基化與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)，通過檢測基因所發(fā)生的異常DNA甲基化改變而對腫瘤進行診斷和治療監(jiān)測具有重要意義。 隨著對DNA甲基化研究的深入，DNA檢測技術(shù)的發(fā)展也不斷更新。亞硫酸氫鹽修飾DNA方法的發(fā)明，使DNA甲基化檢測的瓶頸得以解決。該方法通過化學修飾作用，使DNA中發(fā)生了甲基化修飾的胞嘧啶(C)保持不變，而未發(fā)生甲基化的胞嘧啶則轉(zhuǎn)化U并在后續(xù)的PCR反應中轉(zhuǎn)化為T。這使得本來沒有差異的DNA序列被人為的引入了差異，也使得

3、PCR等檢測方法在DNA甲基化檢測中的應用成為了現(xiàn)實。目前，基于亞硫酸氫鹽修飾的DNA甲基化檢測方法包括MSP。Methylight，COBRA等。但是這些方法相對比較繁瑣，比如MSP方法需要進行電泳和紫外成像，Methylight需要設(shè)計特異的探針，而COBRA只能對幾個特異的位點進行酶切，因此該類方法直接應用于臨床檢測均存在很大的困難。本課題則將SYBR Green Ⅰ熒光PCR應用于DNA甲基化的檢測，直接應用MSP的引物并加入S

4、YBR GreenⅠ熒光染料，實現(xiàn)了自動化檢測。應用此方法對與原發(fā)性肝癌(HCC)的潛在腫瘤標志物MAGE-A1，A3基因異常甲基化改變進行臨床血漿標本的檢測，確認該方法的臨床適用性及檢測效能。實驗目的本課題擬建立一種SYBR Green Ⅰ熒光PCR檢測DNA甲基化的方法，并對該方法的實驗室指標進行評價。然后，將該方法應用于原發(fā)性肝癌(HCC)中具有診斷價值的MAGE-A1，A3甲基化改變的檢測中。檢測HCC血漿標本，肝炎標本和正常對