1、目的:探討順鉑(Cisplatin,CDDP)在體外對(duì)胃癌細(xì)胞株MGC803增殖、凋亡的影響及其作用機(jī)制,為尋求新的胃癌治療策略提供理論依據(jù).方法:采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),將CDDP分為三個(gè)作用濃度:0.1mg/L、1mg/L、10mg/L,用MTT法檢測(cè)三組藥物作用于MGC803細(xì)胞12h、24h、48h、72h后的吸光值,觀察各濃度CDDP對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響;采用AO/EB熒光染色檢測(cè)藥物作用后各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞凋亡率,觀察CDDP對(duì)細(xì)胞

2、凋亡的影響;流式細(xì)胞儀測(cè)定不同的濃度CDDP作用48小時(shí)后細(xì)胞周期變化;RT-PCR檢測(cè)小劑量CDDP(1 mg/L)作用于MGC803細(xì)胞前后凋亡相關(guān)基因p53、survivin mRNA的表達(dá)變化.用SKN-q檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,取檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05.結(jié)果:MTT及熒光染色結(jié)果顯示:CDDP可抑制胃癌細(xì)胞株MGC803的增殖、并誘導(dǎo)其發(fā)生凋亡.高濃度的CDDP(10mg/L)對(duì)此胃癌細(xì)胞系的作用有較強(qiáng)的時(shí)效依賴關(guān)系,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),

3、其抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用越強(qiáng);而低濃度的CDDP(0.1mg/L,1mg/L)在作用24小時(shí)后,對(duì)細(xì)胞增殖的抑制減弱,細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯改變.流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果顯示,不同濃度的CDDP作用于MGC803細(xì)胞48h后,細(xì)胞周期均發(fā)生了明顯的改變,表現(xiàn)為,S期比率增加,G2/M期下降,隨著藥物濃度的增加,CDDP對(duì)細(xì)胞周期的影響越明顯,具有量效依賴關(guān)系.RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示,MGC803細(xì)胞經(jīng)低濃度的CDDP(1mg/L)作用后,p53、s

4、urvivin mRNA在干預(yù)后12h、24h、48h表達(dá)增強(qiáng),與對(duì)照組相比,差異均具有顯著性(p<0.05).p53mRNA在干預(yù)后12h開(kāi)始表達(dá)增強(qiáng),24h達(dá)高峰,接近于對(duì)照組的3倍,48h有所下降,其表達(dá)約為對(duì)照組的2倍;survivin mRNA表達(dá)從藥物干預(yù)后12小時(shí)開(kāi)始持續(xù)增強(qiáng),且具有明顯的時(shí)間依賴性,作用后48h其表達(dá)接近于對(duì)照組的3倍.結(jié)論:CDDP可抑制MGC803細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡;高濃度的CDDP(10mg/L)