1、【目的】探討雷帕霉素（rapamycin）對(duì)體外培養(yǎng)的人晶體上皮細(xì)胞凋亡相關(guān)基因蛋白Bcl-2和Bax表達(dá)和細(xì)胞周期的影響，為臨床上防治后發(fā)性白內(nèi)障開(kāi)發(fā)新型抑制藥物提供理論依據(jù)。
　　 【材料及方法】取二、三代體外培養(yǎng)的HLECs做RAPA藥物實(shí)驗(yàn)。1．MTT比色測(cè)定法：在96孔培養(yǎng)板中將檢測(cè)組細(xì)胞植入，分為六組，每組設(shè)有八個(gè)復(fù)孔。、分別為只含有細(xì)胞及培養(yǎng)液的陰性對(duì)照組、含有培養(yǎng)液不含細(xì)胞及RAPA的空白對(duì)照組、加入含不同濃度雷

2、帕霉素的（20，40，60，80ng/mL)的培養(yǎng)液。經(jīng)藥物作用24、48、72h后用MTT酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀對(duì)各孔實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行吸光光度值檢測(cè)。2．流式細(xì)胞儀：用藥分組同前，每組作用時(shí)間相同，為48h。此后用流式細(xì)胞檢測(cè)儀對(duì)不同濃度組進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)。3．實(shí)時(shí)熒光定量PCR：分別設(shè)定不含雷帕霉素的對(duì)照組以及含不同濃度雷帕霉素 (20，40，60，80ng/mL)的四個(gè)實(shí)驗(yàn)組。采用SYBR green-Ⅰ染料法檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2和Bax mRN

3、A的表達(dá)情況。4．Western-Blot：分別設(shè)定不含雷帕霉素的對(duì)照組以及含不同濃度雷帕霉素 (20，40，60，80ng/mL)的四個(gè)實(shí)驗(yàn)組。采用SDS-PAGE電泳法檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2和Bax 蛋白表達(dá)情況。
　　 【結(jié)果】1．MTT比色測(cè)定：雷帕霉素對(duì)人晶體上皮細(xì)胞增殖的抑制呈時(shí)間、劑量依賴性。2．流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期：雷帕霉素可阻滯人晶體上皮細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)換，使G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少。3.實(shí)時(shí)熒光定量PC