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文檔簡介
1、鹿茸是一種能夠周期性再生的器官,在我國一般特指梅花鹿和馬鹿還未骨化的嫩角,具有很高的藥用價(jià)值。褪黑激素(MLT)是一種主要由松果體分泌的吲哚類內(nèi)分泌激素,在調(diào)節(jié)季節(jié)性繁殖動(dòng)物的生理周期過程中發(fā)揮重要作用。已有研究表明,MLT能影響鹿茸的生長周期,其受體MT1在鹿茸頂端增殖區(qū)中高效表達(dá),且MT1基因與鹿茸的產(chǎn)量密切相關(guān)。然而,MLT促進(jìn)鹿茸間充質(zhì)細(xì)胞增殖的機(jī)制尚不清楚。本課題以梅花鹿鹿茸間充質(zhì)細(xì)胞作為研究對(duì)象,利用RNA干擾等手段對(duì)以上問
2、題予以探究。本研究的結(jié)果將深入了解MLT促進(jìn)鹿茸間充質(zhì)細(xì)胞增殖的機(jī)制,同時(shí)為提高梅花鹿鹿茸產(chǎn)量提供思路。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
(1)鹿茸間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)染GR-2干擾質(zhì)粒48 h后,與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染組MT1基因的mRNA表達(dá)量下降60.1%;轉(zhuǎn)染72 h后,蛋白質(zhì)的表達(dá)量下降62.9%。表明干擾效果明顯。
(2) MTT法檢測細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,MT1干擾組細(xì)胞存活率顯著降低,MLT組(800 pg/mL)細(xì)胞存活率
3、顯著上升,說明干擾MT1后能顯著抑制細(xì)胞增殖。
(3) PI染色后用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期的結(jié)果顯示,MLT組S期高于對(duì)照組,差異顯著;與對(duì)照組相比,MT1組的G2/M期細(xì)胞比例顯著降低。
(4) qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,干擾MT1后,IGF-1及其受體IGF-1R表達(dá)量均顯著降低;而MLT(800 pg/mL)處理后,IGF-1表達(dá)量顯著提高,其受體IGF-1R表達(dá)量也顯著提高。進(jìn)一步用ELISA檢測細(xì)胞上清中
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