1、目的：通過(guò)椎間盤(pán)內(nèi)注射組織蛋白酶L，探討組織蛋白酶L在兔椎間盤(pán)退變中的作用。
　　 方法：健康大白兔60只，雄性，6～8個(gè)月齡，體重2.5～3.0 kg,隨機(jī)分為5組：每組12只，A組（空白對(duì)照組，不做任何處理）、B組（陰性對(duì)照組，注射生理鹽水）、C組（注射組織蛋白酶L濃度為10ng/ul）、D組（注射組織蛋白酶L濃度為20ng/ul）、E組（注射組織蛋白酶L濃度為40ng/ul）。在兔脊柱右側(cè)剃毛備皮約20cm×15cm,常規(guī)

2、消毒、鋪巾，取右側(cè)臥位，沿左側(cè)12 肋末向下至髂脊做縱切口，可見(jiàn)胸腰筋膜后層，向內(nèi)包被骶棘肌，表面呈白色腱膜狀，其外為腹外斜肌起點(diǎn)。切開(kāi)胸腰筋膜后層，在骶棘肌和腰方肌的外緣與胸腰筋膜前層間鈍性分離。近腰方肌前內(nèi)緣，可觸及橫突，以第12肋定位暴露第四腰椎（L4）橫突，在根部去除此橫突，可顯露椎體和椎間盤(pán)，顯露L4/5椎間盤(pán)，用1uL微量注射器將組織蛋白酶L或生理鹽水注射進(jìn)椎間盤(pán)內(nèi)。分別于術(shù)后3、6周每組各處死6只,取出檢測(cè)椎間盤(pán)髓核中蛋白

3、多糖含量，采用HE染色組織學(xué)觀察椎間盤(pán)的退變特征,免疫組織化學(xué)S-P法檢測(cè)椎間盤(pán)組織中MMP3的表達(dá)。
　　 結(jié)果：HE染色組織學(xué)觀察6周時(shí)在實(shí)驗(yàn)組及陰性對(duì)照組椎間盤(pán)中,組織學(xué)觀察到不同程度的椎間盤(pán)退變特征：髄核脊索細(xì)胞逐漸減少，并逐漸被纖維軟骨組織替代，纖維環(huán)與髄核之間失去明顯的界限。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，各時(shí)間段實(shí)驗(yàn)組基質(zhì)金屬蛋白酶3的陽(yáng)性率高于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組（P<0.05）。蛋白多糖含量的測(cè)定顯示6周時(shí)實(shí)驗(yàn)組蛋白多