1、一、目的
　　 吳茱萸堿/吳茱萸次堿(EVO/RUT)是吳茱萸提取物的主要活性成分，藥理學研究發(fā)現二者通過激動辣椒素受體，耗竭神經元/纖維的神經遞質而阻斷疼痛傳導，并可下調環(huán)氧合酶-2的表達或抑制其活性，可能是一種多通道的鎮(zhèn)痛藥物。但辣椒素受體激活伴隨CGRP的合成和釋放增加可能帶來全身不良反應，局部用藥是更好的選擇。本課題在研究提取物純度與溶解度、表觀分配系數、體外經皮滲透能力的關系以及化學促滲劑對其透皮的促進作用的基礎上，構

2、建不同載藥量的吳茱萸提取物乳膏；考察乳膏對熱板和福爾馬林致小鼠疼痛的抑制作用，并通過對神經遞質CGRP及炎性因子PGE2的表達量測定，結合炎性細胞的浸潤程度觀察，探討提取物外用制劑在體鎮(zhèn)痛的可能機制。本課題首次探索吳茱萸提取物局部施予的形式、EVO/RUT經皮滲透規(guī)律及其影響因素，目的是為吳茱萸提取物新適應癥及給藥途徑的研究開發(fā)提供基礎。
　　 二、方法與結果
　　 1.提取物純度對溶解度及表觀分配系數的影響
　　

3、 采用平衡法和搖瓶法測定不同純度提取物中EVO和RUT的溶解度及表觀分配系數，考察純度對溶解度和表觀分配系數的影響。結果EVO和RUT總純度為71.0％、49.2％和25.4％的提取物中EVO和RUT在PEG-400中溶解度分別為：8～14 mg/mL和13～19mg/mL；在異丙醇中均小于7 mg/mL。介質對EVO和RUT的溶解能力依次為PEG-400>Tween-80>RH-40>MCT>無水乙醇≈1，2-丙二醇≈1.3-丁二醇

4、≈異丙醇；lgP在0.6～1.2之間。純度影響EVO和RUT在水性和油性溶劑中的溶解度，純度越高，溶解度越低，而對其在表面活性劑中的溶解度無明顯影響；純度與表觀分配系數無相關性；pH值對提取物中EVO和RUT的溶解和分配均無明顯影響。
　　 2.提取物純度及促滲劑對體外經皮滲透的影響
　　 建立體外經皮滲透實驗方法，探討了純度和促滲劑對EVO和RUT體外經皮滲透行為的影響；采用膠帶剝離角質層，考察角質層在經皮滲透中的作用

5、，研究EVO和RUT體外經皮滲透的特點和規(guī)律，并利用DSC法探索促滲劑對EVO和RUT促滲的可能機制。
　　 不同純度提取物中EVO和RUT的滲透速率分別為0.15～0.18μg/h·cm2和0.17～0.21μg/h·cm2，時滯分別在5.46～6.63 h和7.68～8.83h之間，單位面積24 h累積滲透量均在1.88～3.35μg/cm2之間，表現出滲透速率慢，時滯長，滲透量低的特點，滲透動力學符合零級方程。各純度間累計

6、滲透量和滲透參數無顯著差異。去除角質層后，EVO和RUT經活性表皮的滲透速率及累積滲透量提高了3～6倍，但時滯無差異，表明角質層是EVO和RUT經皮滲透的主要屏障，在活性表皮的擴散過程是其限速步驟。油酸能提高EVO和RUT的滲透速率Js至0.40～0.51；而Transcutol則能使EVO的擴散系數Dm提高至1.74左右，時滯縮短至3.88 h。將脂溶性較高的促滲劑油酸或橙花叔醇及O/W型表面活性劑Transcutol配伍使用，能提高

7、EVO和RUT的滲透速率，并縮短時滯。DSC結果顯示促滲劑通過增加角質層脂質的流動性發(fā)揮促滲作用。
　　 3.提取物外用制劑的構建及評價
　　 單因素考察篩選了乳膏類型、HLB值、乳化劑組合等因素對乳膏外觀、粒子形態(tài)、粘稠性和累積滲透量的影響，確定以O/W型乳膏為好，處方組成為：高純度吳茱萸提取物(0.1％～0.4％)、PEG-400(25％)、單硬脂酸甘油酯(1％)、十八醇(8％)、橙花叔醇(5％)、Span60(4.

8、1％)、RH-40(3.9％)、丙二醇(5％)。
　　 乳膏外觀為淡黃色半固體，均勻細膩，pH為6.81±0.04，錐入度在102.4～119.7 mm。通過改良制備工藝，將藥物PEG-400溶液加入油相，避免了水對EVO和RUT溶解度的不良影響，提高了乳膏的載藥量。分散相的PEG-400未向連續(xù)相轉移，未出現明顯的析晶或相分離現象；乳膏于西林瓶中40℃和-20℃條件下放置10天，外觀無明顯改變。0.1％、0.2％和0.4％乳膏

9、中EVO和RUT經離體乳豬皮膚的累積滲透量呈載藥量依賴性。
　　 4.提取物乳膏的局部鎮(zhèn)痛作用及機制研究
　　 采用昆明小鼠為模型動物，考察提取物乳膏對熱刺激和化學刺激引起疼痛的作用，并采用ELISA測定疼痛部位皮膚中CGRP及PGE2的表達，利用組織切片考察疼痛部位炎性細胞浸潤的程度，探討乳膏在體鎮(zhèn)痛的可能機制。
　　 局部應用提取物乳膏能提高小鼠對熱刺激和化學刺激的耐受，并呈載藥量依賴性。ELISA結果表明提

10、取物乳膏能明顯降低皮下注射福爾馬林3min后疼痛部位皮膚中CGRP的表達，且CGRP隨時間的變化減?。欢楦鄬ζつw中PGE2的含量無影響；組織切片結果證實提取物乳膏能顯著抑制福爾馬林引起的炎癥細胞浸潤程度，推測鎮(zhèn)痛機制可能是耗竭并阻斷CGRP的傳導并協同抗炎作用，但抗炎作用的具體機制仍需進一步研究證實。
　　 三、結論
　　 提取物純度能影響EVO和RUT的溶解度，而對表觀分配系數及體外經皮滲透的影響無顯著差異。EVO和