1、人防御素(Humandefensins)屬于抗菌肽家族，是人體內(nèi)源免疫系統(tǒng)的重要組成部分。人防御素具有廣泛的抗菌譜，而且致病微生物不易對它產(chǎn)生耐藥性，因此有很好的藥用前景。本文建立在實(shí)驗(yàn)室關(guān)于人β防御素2的成果基礎(chǔ)上，考察了人β防御素3(HBD3)和人β防御素4(HBD4)的表達(dá)條件，人β防御素4的分離和純化以及重組人β防御素4的抑菌活性。 本文利用進(jìn)行了密碼子優(yōu)化的人β防御素4表達(dá)菌種BL21(DE3)/pET32-smHBD

2、4，考慮誘導(dǎo)溫度、誘導(dǎo)劑量、誘導(dǎo)時機(jī)、表達(dá)時間等因素，進(jìn)行搖瓶發(fā)酵條件優(yōu)化。獲得優(yōu)化培養(yǎng)條件：誘導(dǎo)溫度為34℃，IPTG量為0.4mM，誘導(dǎo)時機(jī)為對數(shù)生長期中期，誘導(dǎo)后表達(dá)6hour終止。通過條件優(yōu)化，目標(biāo)蛋白融合蛋白TrxA-HBD4產(chǎn)量可達(dá)2.68g/l左右(即成熟的HBD4可達(dá)0.69g/l)，目標(biāo)融合蛋白占可溶蛋白65％左右。 隨后，文章對所得重組人β防御素4(HBD4)的分離純化工藝進(jìn)行了探索，在經(jīng)過Ni離子親和層析，

3、腸激酶酶切，陽離子交換層析，凝膠脫鹽和冷凍干燥一系列處理后，獲得了純度為95％的重組HBD4，整個分離工藝流程回收率為53％。 接著，本文對重組HBD4的抑菌活性進(jìn)行了考察，通過固體平板擴(kuò)散法觀察到了重組HBD4對綠膿桿菌P.aeruginosaATCC27853和大腸桿菌E.coliK12D31的抑菌活性；采用液體培養(yǎng)法，考察了重組HBD4濃度與其對大腸桿菌E.coliK12D31的抑菌活性的關(guān)系，并繪制了殺菌曲線。