1、目的 流行病學(xué)資料顯示膳食中攝入過(guò)量碘會(huì)導(dǎo)致自身免疫性甲狀腺疾病的發(fā)生，但是其發(fā)病機(jī)制至今仍未完全闡明。臨床上有患者在病毒感染后誘發(fā)了自身免疫性甲狀腺炎的現(xiàn)象，最近有研究發(fā)現(xiàn)EB病毒，單純皰疹病毒等感染也可以誘發(fā)自身免疫性甲狀腺炎。本實(shí)驗(yàn)室前期工作發(fā)現(xiàn)poly(I:C)有加重碘過(guò)量誘發(fā)的nod小鼠甲狀腺炎的現(xiàn)象，本實(shí)驗(yàn)將要證實(shí)病毒感染加重碘過(guò)量所致甲狀腺炎的途徑，探討poly(I:C)對(duì)過(guò)量碘所致不同品系小鼠甲狀腺炎發(fā)病的影響及

2、其機(jī)制。 方法 本實(shí)驗(yàn)選用自身免疫性疾病易感的NOD小鼠和非易感的BALB/c小鼠作為試驗(yàn)動(dòng)物，通過(guò)飲過(guò)量碘水復(fù)制甲狀腺炎動(dòng)物模型，以poly(I:C)作為病毒類(lèi)似物，觀(guān)察其對(duì)甲狀腺炎發(fā)病的影響和對(duì)碘過(guò)量引起的不同遺傳背景的動(dòng)物甲狀腺炎的功能改變、浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞鑒定，炎癥因子表達(dá)變化。選用7-8周齡，雌性NOD鼠，26只隨機(jī)分為4組，對(duì)照組5只，其余每組7只；雌性BALB/c鼠，31只隨機(jī)分為4組，對(duì)照組7只，其余每組8只

3、，分別為：(1)對(duì)照組(C):無(wú)碘添加水；(2)碘過(guò)量組(HI)：飲0.05％Nal水；(3)poly(I:C)組(P):第一周每天和最后一周隔poly(I:C)5.0μg/g體重腹腔注射；(4)碘過(guò)量聯(lián)合poly(I:C)組(I+P)：飲0.05％Nal水并腹腔注射poly(I:C)，按5.0μg/g體重標(biāo)準(zhǔn)，分別于實(shí)驗(yàn)第1周和最1周每F1、隔日1次。作用8周后處死：測(cè)量體重、甲狀腺重量及解剖形態(tài)；取全血，甲狀腺和脾；HE染色觀(guān)察甲狀

4、腺組織形態(tài)學(xué)變化；采用RIA法檢測(cè)血清中甲狀腺激素及甲狀腺激素刺激素水平；免疫熒光檢測(cè)甲狀腺CD3和TLR3的表達(dá)，SYBRGREEN實(shí)時(shí)熒光定量PCR法分析基因IL-4，IFN-γ和IFN-α的mRNA表達(dá)。 結(jié)果 兩品系小鼠甲狀腺相對(duì)重量在P組均無(wú)明顯變化，碘過(guò)量組和I+P組均明顯增加(P<0.01)。NOD鼠血清總T4水平在I+P組較對(duì)照組下降，同組TSH水平較對(duì)照組有所升高(P<0.05)。BALB/c小鼠各組均

5、未出現(xiàn)明顯的改變(P>0.05)。 HE染色結(jié)果顯示：NOD小鼠和BALB/c小鼠P組甲狀腺與C組比較未出現(xiàn)明顯病理變化；NOD小鼠HI組甲狀腺濾泡膠質(zhì)蓄積性擴(kuò)張，大小不等，可見(jiàn)融合濾泡，上皮細(xì)胞呈低立方狀或扁平狀，大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，呈灶性分布，其中甲狀腺濾泡受累程度I級(jí)(57.2％)、II級(jí)(42.8％)；BALB/c鼠甲狀腺濾泡擴(kuò)張，大小不等，濾泡內(nèi)有膠質(zhì)潴留而未見(jiàn)有明顯的炎細(xì)胞浸潤(rùn)；NOD鼠I+P組除有上述與HI組甲狀腺相

6、似的病變外，甲狀腺濾泡受累程度更為嚴(yán)重，出現(xiàn)III級(jí)(42.8％)，IV級(jí)(28.6％)，并有局灶纖維化。BALB/c小鼠I+P組出現(xiàn)甲狀腺濾泡擴(kuò)張和膠質(zhì)潴留，較I組稍有加重，但仍未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。 CD3免疫熒光染色顯示NOD鼠HI組和I+P組CD3陽(yáng)性淋巴細(xì)胞較對(duì)照組和P組增多，呈灶性分布，而B(niǎo)ALB/c鼠各組均幾乎見(jiàn)不到CD3陽(yáng)性的細(xì)胞。TLR3免疫熒光檢測(cè)顯示NOD小鼠P組，HI組和I+P組甲狀腺濾泡上皮呈弱陽(yáng)性，HI組和

7、I+P組并見(jiàn)TLR3強(qiáng)陽(yáng)性的非濾泡上皮細(xì)胞，I+P組陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多最為明顯，而B(niǎo)ALB/c鼠除I+P組有少量弱陽(yáng)性細(xì)胞外其余各組均未見(jiàn)TLR3陽(yáng)性細(xì)胞。 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示，NOD鼠和BALB/c鼠甲狀腺I(mǎi)L4相對(duì)表達(dá)量在P組有所升高，HI組NOD小鼠升高(P<0.05)，而B(niǎo)ALB/c鼠變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，I+P組NOD小鼠無(wú)明顯變化，BALB/c下降(P<0.05)；脾的IL-4的表達(dá)，NOD小鼠

8、碘HI組下降(P<0.05)其余各組無(wú)明顯變化，BALB/c鼠在HI組和I+P組升高(P<0.05)，P組未見(jiàn)明顯變化。NOD鼠甲狀腺中IFN-γ的表達(dá)在HI組以及I+P組均有不同程度的升高，而在P組無(wú)明顯變化(P>0.05)；BALB/c鼠的表達(dá)與NOD鼠相似HI組以及I+P組均有不同程度的升高(P<0.05)，而在P組無(wú)明顯變化(P>0.05)。脾IFN-γ的表達(dá)在NOD鼠三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均有不同程度的升高，而在BALB/c脾組織中均未見(jiàn)

9、明顯改變(P>0.05)。IFN-α在NOD鼠甲狀腺和脾的表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組均比對(duì)照組有明顯升高，其中I+P組表達(dá)量最高(P<0.05)。BALB/c鼠甲狀腺I(mǎi)FN-α的表達(dá)各實(shí)驗(yàn)組也均有升高，脾IFN-α的表達(dá)HI組和I+P組升高(P<0.05)，P組未見(jiàn)明顯變化。 結(jié)論 1.碘過(guò)量刺激NOD鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞表達(dá)TLR3，通過(guò)TLR3途徑激活固有免疫反應(yīng)，是促發(fā)自身免疫性甲狀腺炎的重要途徑之一。 2.poly(I

10、:C)單獨(dú)作用可輕度刺激甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞TLR3的表達(dá)，并有輕度抑制甲狀腺功能的趨勢(shì)，但未引發(fā)甲狀腺炎。 3.碘過(guò)量誘發(fā)NOD小鼠自身免疫性甲狀腺炎，甲狀腺組織表達(dá)TLR3增加，在此基礎(chǔ)上poly(I:C)作為T(mén)LR3的配體與TLR3結(jié)合，激活TLR3信號(hào)通路，使I型干擾素(IFN-α等)明顯升高，激活免疫介導(dǎo)的特定組織細(xì)胞的破壞，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。 4.機(jī)體發(fā)生甲狀腺炎時(shí)甲狀腺組織中I型干擾素IFN-γmRNA表達(dá)