1、本研究旨在：①進(jìn)一步探討茶多酚與茶氨酸的功能，組成以茶多酚、茶氨酸為主體的強(qiáng)效復(fù)合劑，開(kāi)展抗菌抑菌、增強(qiáng)機(jī)體抵抗力、抗瘤抑瘤以及抗(降)血脂的實(shí)驗(yàn)研究；②通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究，為茶氨酸、茶多酚的生理功能科學(xué)應(yīng)用提供有效的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)；③利用其抗菌抑菌和增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力的功能，為開(kāi)發(fā)安全無(wú)公害純天然植物飼料添加劑，推進(jìn)無(wú)公害畜產(chǎn)品生產(chǎn)，提供科學(xué)的基礎(chǔ)依據(jù)；④為開(kāi)發(fā)以茶多酚和茶氨酸為主，具有增強(qiáng)免疫力和抵抗力、抗瘤抑瘤、抗(降)血脂的藥品、功能性食品

2、提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)；⑤為尋求天然植物成分復(fù)合劑抗“SARS”、“禽流感”等人畜共患的病毒、細(xì)菌性流行病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 首先利用7種常見(jiàn)、易得、具有類似功能的植物提取物成分，進(jìn)行茶多酚、茶氨酸功能增效物的篩選L8(27)的體外抗菌實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，魚(yú)腥草素、牛至油同茶多酚、茶氨酸配合抗菌抑菌增效效果較好，形成了茶多酚復(fù)合劑。茶多酚復(fù)合劑分別對(duì)Colibacillus、Ssalmonella、Staphylococcusaureus抑菌效果

3、及有效濃度L9(34)配合的實(shí)驗(yàn)，得出對(duì)Colibacillus、Salmonella和Staphylococcusaureus最低抑菌濃度(MIC)分別為1.25、0.6250.625mg·ml-1，最低殺菌濃度(MBC)為2.5、1.25、1.25mg·ml-1；對(duì)Colibacillus、Salmonella、Staphylococcusaureus作用時(shí)間與抑菌率(IBR)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)均隨時(shí)間和濃度的增加提高，并發(fā)現(xiàn)了試物同細(xì)菌作

4、用的僵持期(4～8h)；小鼠體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)表明，在感染Colibacillus和Staphylococcusaureus之前18h灌喂茶多酚復(fù)合劑，死亡率(72h)分別為40％、30％，感染后1h灌喂死亡率(72h)分別為70％、60％，同對(duì)照組比差異極顯著(p＜0.01)和顯著(p＜0.05)。茶多酚復(fù)合劑有很好的體內(nèi)抗菌效果。 采用0、50、100、150mg·kg-1d-1BW-1茶多酚復(fù)合劑灌喂，增強(qiáng)小鼠免疫功能機(jī)理的實(shí)驗(yàn)

5、，設(shè)陰性對(duì)照組(C0)和低(C1)、中(C2)、高(C3)4個(gè)劑量組，每組10～15只小鼠，預(yù)飼7d，實(shí)驗(yàn)期30～45d。末次灌喂24h后分別測(cè)定小鼠細(xì)胞免疫功能、體液免疫功能、非特異性免疫等指標(biāo)。結(jié)果表明：茶多酚復(fù)合劑明顯刺激脾淋巴細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化，各組的OD差值均高于C0組，有顯著或極顯著性差異((P＜0.05，P＜0.01)；用二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，各劑量組效果均高于C0組，差異達(dá)顯著或極顯著水平(P＜0.0

6、5，P＜0.01)，具有顯著促進(jìn)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的作用；測(cè)定小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)，各組均高于C0，C1組(50mg·kg-1·d-1·BW-1)同C0組差異顯著(P＜0.05)，C2組(100mg·kg-1·d-1·BW-1)和C3組(150mg·kg-1·d-4·BW-1)與C0組差異極顯著(P＜0.01)，具有促進(jìn)分泌IgM抗體生成細(xì)胞增殖的作用，在增強(qiáng)機(jī)體免疫方面具有極其重要的作用；經(jīng)小鼠血清溶血素的測(cè)定，小鼠的抗體積數(shù)均值C1與C0

7、比較差異顯著性(P＜0.05)，C2、C3同C0比較差異極顯著(P＜0.01)，明顯提高小鼠血清溶血素，增加IgG、IgM的數(shù)量；小鼠碳粒廓清實(shí)驗(yàn)各劑量組的吞噬指數(shù)均高于C0組，差異顯著(P＜0.05)，表明該試物具有增進(jìn)小鼠胸腺、脾臟等免疫器官和促進(jìn)小鼠單核-巨噬細(xì)胞吞噬功能作用；小鼠腹腔單核-巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞(CRBC)實(shí)驗(yàn)，各組小鼠腹腔巨噬細(xì)胞對(duì)CBRC的吞噬率均高于C0(P＜0.05)，能增強(qiáng)非特異性免疫器官胸腺、脾臟的功能

8、，促進(jìn)小鼠非特異性免疫功能；小鼠NK細(xì)胞活性影響實(shí)驗(yàn)顯示，對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性有顯著性影響(P＜0.05或P＜0.01)，能夠有效地保護(hù)免疫細(xì)胞的細(xì)胞膜，控制LDH外透，提高NK細(xì)胞活性；測(cè)定小鼠血清溶菌酶含量，能提高溶菌酶的含量，增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)。 體外抑(抗)瘤實(shí)驗(yàn)表明，處理48h后，低、中、高劑量組抑瘤率分別達(dá)35.92％、42.88％、53.85％，差異顯著(P＜0.05或P＜

9、0.01)，處理72h后，低、中、高劑量組抑瘤率分別達(dá)41.29％、46.58％、61.63％，效果顯著；小鼠體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)表明，能顯著降低腫瘤塊的重量(P＜0.01)，體內(nèi)抑瘤率達(dá)到26％(P＜0.01)。經(jīng)HE染色切片觀察，試物組腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的形態(tài)改變，細(xì)胞核染藍(lán)紫色，細(xì)胞質(zhì)桃紅色，組織細(xì)胞排列緊密，呈現(xiàn)腫瘤細(xì)胞凋亡的典型特征；腫瘤細(xì)胞DNA凝膠電泳，試物組可見(jiàn)明顯的梯形條帶，出現(xiàn)細(xì)胞凋亡的重要生化特征。 抗(抑)S1

10、80肉瘤的機(jī)理研究表明，茶多酚復(fù)合劑使S180G1期細(xì)胞由51.1％(0μg·ml-1)增加至80.5％(150μg·ml-1)，S期和G2M期細(xì)胞比例減少，細(xì)胞分裂增殖指數(shù)(PI)減少，細(xì)胞分裂增殖逐漸減弱。隨著濃度的增加，誘導(dǎo)S180肉瘤細(xì)胞凋亡率(Apo)在50μg·ml-1濃度時(shí)達(dá)到極顯著的水平(P＜0.01)；茶多酚復(fù)合劑能明顯上調(diào)S180肉瘤細(xì)胞PTEN蛋白的表達(dá)，分別由35.61±0.48(0μg·ml-1)增加至141.

11、79±3.01(150μg·ml-1)，達(dá)到了顯著水平(P＜0.05、P＜0.01)，極顯著減輕H2O2造成的DNA片段程度(P＜0.01)，使瘤細(xì)胞阻滯于G1/S限制點(diǎn)，誘導(dǎo)其凋亡；不同濃度茶多酚復(fù)合劑對(duì)H2O2(0.4mmol·L-1)誘導(dǎo)的S180肉瘤細(xì)胞c-myc、Bcl-2、P53、c-jun、c-fos基因，明顯抑制其表達(dá)。 用健康雄性S·D大鼠5組，飼喂42d和70d，進(jìn)行抗(降)血脂的效果實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示：高脂模型

12、組(第2組)、高脂試物組(第5組)之間肝指數(shù)(LI)差異極顯著(P＜0.01)，大鼠血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及游離脂肪酸(FFA)含量，第2組、第3組之間差異顯著(P＜0.05)。經(jīng)肝臟組織學(xué)觀察，正常對(duì)照組(第1組)肝臟色澤、質(zhì)地均正常。第2組肝臟外觀彌漫腫大，邊緣變鈍，顏色黃褐，可見(jiàn)表面白色斑點(diǎn)。第5組肝脂肪浸潤(rùn)狀態(tài)明顯減輕。肝組織切片顯微觀察，第1組均正常，第2組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞彌漫性脂肪變性，大脂滴將肝細(xì)胞核

13、擠向一側(cè)。中央靜脈管壁周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，肝竇擴(kuò)張；第5組脂肪肝狀細(xì)胞明顯減少，肝索排列整齊緊密，匯管區(qū)清晰，同肝小葉界限清楚。 抗(降)血脂生化機(jī)理實(shí)驗(yàn)表明，血清中LI、TC、TG、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、極低密度脂蛋白(VIDL-C)高脂模型組(第2組)同正常對(duì)照組(第1組)比較，差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)，高脂試物組(第3組)同第1組之間差異不顯著性(P＞0.0

14、5)，第2組和第3組比較差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)；測(cè)定了大鼠血清中反應(yīng)肝臟降解代謝功能和肝損傷的3種酶，第2組和第3組之間谷氨酸草酰乙酸轉(zhuǎn)氨酶(GlutamicoxaloacetictransaminaseGOT)、堿性磷酸酶(AlkalinephosphataesALP)差異顯著或極顯著(P＜0.05，P＜0.01)，谷氨酸丙酮酸轉(zhuǎn)氨酶(GlutamicpyruvictransaminaseGPT)雖差異不顯著(