1、在過(guò)去的十幾年里關(guān)于母系遺傳感音神經(jīng)性耳聾的發(fā)病機(jī)制與線(xiàn)粒體基因突變相關(guān)性研究取得了很大的進(jìn)展。目前研究認(rèn)為，線(xiàn)粒體12SrRNA基因和tRNASer(UCN)基因是導(dǎo)致聽(tīng)力下降的基因突變熱點(diǎn)位置。12SrRNA基因A1555G、C1494T、961insC突變與非綜合征型耳聾和氨基糖甙類(lèi)抗生素導(dǎo)致的藥物性耳聾均有關(guān)，tRNASer(UCN)基因上與聽(tīng)力下降相關(guān)的基因突變有A7445G、7472insC、T7510C、T7511C。線(xiàn)粒

2、體12SrRNA基因上的均質(zhì)性mtDNAA1555G突變是最先發(fā)現(xiàn)的與非綜合征型耳聾相關(guān)的線(xiàn)粒體基因突變，可以單獨(dú)導(dǎo)致耳聾也可引起藥物性耳聾。在美國(guó)大約15％氨基糖甙類(lèi)藥物致聾為mtDNAA1555G突變引起。隨后的研究表明mtDNAA1555G突變的發(fā)生率比預(yù)想的要高，在西班牙總計(jì)70個(gè)遺傳性感音神經(jīng)性耳聾家系中有19個(gè)家系攜帶有mtDNAA1555G突變，存在于不同的線(xiàn)粒體DNA單體型中。在上海一個(gè)區(qū)167名耳聾病人中有21.9％為

3、氨基糖甙類(lèi)藥物致聾，其中至少有30％為mtDNAA1555G突變引起。所以研究遺傳性感音神經(jīng)性耳聾的發(fā)病機(jī)制與線(xiàn)粒體基因突變之間的關(guān)系具有很重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)意義。目前認(rèn)為除環(huán)境因素，核基因?qū)€(xiàn)粒體DNA突變的表現(xiàn)型有影響之外，線(xiàn)粒體DNA單體型對(duì)表現(xiàn)型可能有一定的影響，在這方面爭(zhēng)論很多。本研究旨在深入探討母系遺傳性感音神經(jīng)性耳聾家系發(fā)病原因及線(xiàn)粒體基因突變所導(dǎo)致的耳聾的突變特性。 目的：研究母系遺傳感音神經(jīng)性耳聾的發(fā)病機(jī)制與線(xiàn)粒

4、體基因突變之間的關(guān)系。通過(guò)測(cè)序并分析mtDNAA1555G突變陽(yáng)性家系的12SrRNA基因和tRNASer(UCN)基因序列，尋找參與A1555G突變病理作用的mtDNA基因突變。如突變?yōu)槎鄳B(tài)性可由此探討DNA單體型與A1555G耳聾表型關(guān)系。如突變?yōu)橹虏⌒酝蛔兛捎纱税l(fā)現(xiàn)新致病突變?yōu)槎@基因診斷提供方法學(xué)基礎(chǔ)。 方法：收集并分析11個(gè)母系遺傳性感音神經(jīng)性耳聾家系的遺傳學(xué)資料和臨床資料。提取家系中部分母系成員的外周靜脈血樣本，從白

5、細(xì)胞中提取DNA,聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增mtDNA目的片段，對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行DNA測(cè)序，對(duì)發(fā)現(xiàn)的基因突變進(jìn)行計(jì)算機(jī)輔助的二級(jí)結(jié)構(gòu)模擬來(lái)分析發(fā)生突變后RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性以及能量變化，比較12SrRNA基因突變位點(diǎn)在人、鼠、牛、爪蟾四個(gè)物種間的保守性及對(duì)線(xiàn)粒體功能的影響判斷突變的病理意義。 結(jié)果：測(cè)序結(jié)果表明，十一個(gè)家系mtDNA12SrRNA基因中都存在著mtDNAA1555G點(diǎn)突變，其中一個(gè)家系mtDNA12SrRNA基因中同時(shí)存在A

6、1555G、G1007A、A1313G點(diǎn)突變；mtDNAnt1007位點(diǎn)在人、鼠、爪蟾均為G，在牛為A；nt1313人、鼠、牛均為A，在爪蟾為T(mén)，都是比較保守的位點(diǎn)。計(jì)算機(jī)輔助二級(jí)結(jié)構(gòu)模擬分析表明A1555G、G1007A、A1313G突變后12SrRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性下降，正常12SrRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)自由能為-350.8Kcal/mol，G1007A突變后為-349.1Kcal/mol(+1.7Kcal/mol)；A1313G突變后為-

7、351.6Kcal/mol(-0.8Kcal/mol)；A1555G突變后為-354.6Kcal/mol(-3.8Kcal/mol)；三個(gè)突變共存時(shí)為-356.6Kcal/mol(-5.8Kcal/mol)，G1007A和A1313G點(diǎn)突變?cè)贏1555G點(diǎn)突變對(duì)12SrRNA二級(jí)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性影響方面有協(xié)同作用。另一個(gè)家系COI/tRNASer(UCN)基因中同時(shí)存在著G7444A突變。G7444A突變?cè)斐删€(xiàn)粒體重鏈上COI基因終止密碼子A