1、目的：體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并予HGF、FGF-4誘導(dǎo)，結(jié)合組織工程材料PGA支架培養(yǎng)后回植于肝切模型，構(gòu)建組織工程化肝臟組織，探討以骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程化肝臟的可行性。 方法：分離SD大鼠的BMSCs，鑒定后加HGF、FGF-4為主要誘導(dǎo)因子的誘導(dǎo)液成肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)，對(duì)誘導(dǎo)組細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察及功能表達(dá)檢測(cè)。綠色熒光蛋白(GFP)基因轉(zhuǎn)染BMSCs以示蹤。BMSCs接種于PGA，體外繼續(xù)誘導(dǎo)

2、培養(yǎng)2w后將細(xì)胞-PGA復(fù)合物回植入肝衰竭模型肝臟及腹腔內(nèi)，對(duì)照組行單純1/3肝切。分別于回植后14d、28d及56d，對(duì)回植物進(jìn)行大體觀察，回植后第56d取新生肝臟組織行冰凍切片、HE染色等組織學(xué)觀察，免疫組化檢測(cè)新生組織ALB、CK18及AFP的蛋白質(zhì)合成；RT-PCR檢測(cè)aFP、ALB、CK18的mRNA表達(dá)。 結(jié)果：分離取得BMSCs貼壁生長(zhǎng)，經(jīng)FACS檢測(cè)CD34陰性、CD105陽(yáng)性；BMSCs成骨誘導(dǎo)檢測(cè)鈣結(jié)節(jié)、AK

3、P、OCN陽(yáng)性；成脂肪誘導(dǎo)細(xì)胞油紅0染色陽(yáng)性；成軟骨表達(dá)誘導(dǎo)II型膠原。誘導(dǎo)組在培養(yǎng)第14天細(xì)胞分布呈典型的鋪路石狀；在培養(yǎng)的第7、14、21d，誘導(dǎo)組細(xì)胞ALB免疫組化染色和aFP、ALB、CK18的mRNA檢測(cè)均為陽(yáng)性。細(xì)胞—PGA復(fù)合物回植后第56天，PGA降解完全。冰凍切片示GFP陽(yáng)性提示新生肝臟來(lái)源于細(xì)胞—PGA回植物。新生肝臟組織ALB、CK18表達(dá)陽(yáng)性，AFP表達(dá)陰性，細(xì)胞功能與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異。 結(jié)論：骨髓間