花吊絲竹PEG蛋白分級(jí)及其在干旱脅迫下生理與蛋白的響應(yīng).pdf_第1頁
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1、干旱的生長(zhǎng)環(huán)境是植物生長(zhǎng)發(fā)育中一個(gè)非常重要的限制因子,植物為適應(yīng)干旱的環(huán)境,會(huì)依據(jù)自身的習(xí)性啟動(dòng)從植物外部形態(tài)、生理代謝、生化過程及分子水平等的一系列響應(yīng)?;ǖ踅z竹(Dendrocalamus minor var.amoenus)是重要的園林觀賞和經(jīng)濟(jì)筍用竹種。該竹子還在福建地區(qū)試行沿海沙地的引種,作為防風(fēng)固沙的新樹種,但是干旱、貧瘠的條件嚴(yán)重影響該竹種效益和特性。以2年生花吊絲竹母竹為供試材料,通過自然耗水進(jìn)行干旱處理,研究花吊絲竹生

2、理參數(shù)的變化及蛋白的差異表達(dá)。
  本研究主要內(nèi)容包括:⑴2種蛋白提取方法(TCA/酚提結(jié)合法和PEG法)的SDS-PAGE分析表明:PEG法中5個(gè)組分的條帶差異明顯,全蛋白得到了有效分離,在16%PEG濃度的F3中富集到了較多高豐度蛋白,與NF中2條深色蛋白帶(15 kDa上箭頭和60 kDa下箭頭)位置基本相同;而F4及F5在相同區(qū)域并沒有高豐度蛋白,表明了花吊絲竹葉片全蛋白能通過PEG得到有效的分離。⑵2種蛋白提取方法(TC

3、A/酚提結(jié)合法和PEG法)的2-DE分析表明:PEG分級(jí)法中F1-F5檢測(cè)蛋白總數(shù)超過1700個(gè),但是相鄰組存在一定的重疊率;而TCA丙酮/酚提結(jié)合法只能檢測(cè)到570個(gè)左右的蛋白點(diǎn),5個(gè)組與NF平均有439個(gè)蛋白點(diǎn)匹配,重疊率達(dá)到77.9%以上,顯著提高了2-DE的分辨率,表明PEG法對(duì)于花吊絲竹低豐度蛋白分離及后續(xù)鑒定是切實(shí)可行且較為理想的,但由于繁瑣的操作步驟,會(huì)造成一定的蛋白損失。⑶干旱脅迫下花吊絲竹葉片光合作用參數(shù)變化為:凈光合

4、速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)和蒸騰速率(Tr)都出現(xiàn)顯著下降,Pn對(duì)脅迫程度的響應(yīng)相較Gs和Tr更敏感;胞間CO2濃度(Ci)在0-15 d與對(duì)照組無顯著差異,而在15-26 d出現(xiàn)下降趨勢(shì),在26 d達(dá)到最低,隨后急劇上升;氣孔限制值(Ls)在10-26 d呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),同樣在26 d出現(xiàn)峰值,26-30 d出現(xiàn)顯著的下降,Ci和Ls出現(xiàn)了相反的趨勢(shì)。表明在輕度干旱脅迫下,氣孔限制性因素是Pn下降的主要因素;而隨著脅迫程度加深,P

5、SⅡ光合結(jié)構(gòu)損害和酶類失活,非氣孔限制因素是Pn下降的主導(dǎo)因素。⑷干旱脅迫下花吊絲竹葉片葉綠素?zé)晒鈪?shù)變化為:光系統(tǒng)Ⅱ(PSⅡ)的實(shí)際光化學(xué)效率(ΦPSⅡ)、表觀光合電子傳遞速率(ETR)和非光化學(xué)猝滅系數(shù)(qN)在脅迫后段(15-30 d)一直出現(xiàn)顯著下降,而葉片初始熒光(Fo)在后期呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。說明處理時(shí)間不長(zhǎng)時(shí),通過減少光捕獲、熱耗散和酶活的調(diào)節(jié)協(xié)同作用維持光合機(jī)構(gòu)功能,實(shí)現(xiàn)光保護(hù)。而隨著脅迫時(shí)間的延長(zhǎng),葉片的光合電子傳遞受阻

6、,PSⅡ光合結(jié)構(gòu)受到嚴(yán)重?fù)p傷,正常的光合作用途徑和代謝途徑受阻。⑸干旱脅迫下花吊絲竹葉片相關(guān)物質(zhì)或保護(hù)酶類變化為:超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)的含量呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),而脯氨酸(PRO)和丙二醛(MDA)的含量則一直增加。表明在處理前期,PSⅡ光系統(tǒng)活性降低會(huì)引起光能過剩光抑制,形成過量的活性氧簇,造成膜脂過氧化,保護(hù)酶類活性受到干旱誘導(dǎo)出現(xiàn)上升,但是隨著脅迫程度加深,活性氧清除酶類的活性出現(xiàn)下降,嚴(yán)重?fù)p害細(xì)胞結(jié)構(gòu)

7、,各項(xiàng)生理代謝途徑受到損傷和阻遏。同時(shí), CAT含量上升的幅度比SOD更大,花吊絲竹CAT對(duì)干旱脅迫反應(yīng)更加敏感。⑹干旱脅迫下花吊絲竹葉片差異表達(dá)蛋白的2-DE和MS實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:干旱脅迫下出現(xiàn)41個(gè)顯著差異表達(dá)的蛋白點(diǎn),表達(dá)上調(diào)的有23個(gè),表達(dá)下調(diào)的有13個(gè),新出現(xiàn)的有5個(gè)。對(duì)這些點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS質(zhì)譜鑒定分析,鑒定出33個(gè)蛋白點(diǎn),這些差異表達(dá)蛋白質(zhì)與光合作用、能量代謝和逆境脅迫響應(yīng)有關(guān)。參與光合作用的蛋白質(zhì)為核酮糖1,5

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