1、目的:
　　通過(guò)觀察比較黃連、生地及其配伍對(duì)胰島素抵抗（Insulin Resistance,IR）3T3-L1脂肪細(xì)胞IRS-PI3K/CAP-Cbl信號(hào)通路相關(guān)分子表達(dá)的影響，探討黃連、生地及其配伍改善IR的分子機(jī)制及其配伍的科學(xué)內(nèi)涵。
　　方法:
　　第一部分 建立IR3T3-L1脂肪細(xì)胞模型，觀察黃連、生地及其配伍對(duì)IR脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響
　　制備黃連、生地及其配伍含藥血清，誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪

2、細(xì)胞分化成熟，以25mmol/L葡萄糖聯(lián)合0.6nmol/L胰島素建立IR3T3-L1脂肪細(xì)胞模型，分別給予黃連、生地及其配伍含藥血清、馬來(lái)酸羅格列酮進(jìn)行干預(yù)，另設(shè)立空白血清對(duì)照組（以不含藥血清進(jìn)行干預(yù)）及正常組（正常脂肪細(xì)胞），以葡萄糖氧化酶法測(cè)定各組培養(yǎng)基中葡萄糖的消耗量。
　　第二部分 觀察黃連、生地及其配伍對(duì)IR3T3-L1脂肪細(xì)胞IRS-PI3K信號(hào)通路相關(guān)分子IRS-1tyr608、IRS-1ser307、Aktser

3、473磷酸化水平的影響3T3-L1脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化、IR模型建立、分組及干預(yù)方法同上。用RIPA細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞收集蛋白，以Western blot檢測(cè)IRS-1tyr608、IRS-1ser307、Aktser473磷酸化水平。
　　第三部分 觀察黃連、生地及其配伍對(duì)IR3T3-L1脂肪細(xì)胞CAP-Cbl信號(hào)通路相關(guān)分子Glut4、c-Cbltyr700、CAP mRNA及表達(dá)水平的影響3T3-L1脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化、IR模

4、型建立、分組及干預(yù)方法同上。用RIPA細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞收集蛋白，以Western blot檢測(cè)CAP、Glut4及c-Cbltyr700磷酸化蛋白表達(dá)水平，以PCR檢測(cè)CAP mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　第一部分 黃連、生地及其配伍對(duì)IR3T3-L1脂肪細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響
　　與正常組比較，模型組葡萄糖消耗量顯著降低（P<0.01）；與模型組比較，黃連組葡萄糖消耗量增加（P<0.05），生地、黃連+生地配

5、伍組葡萄糖消耗量顯著增加（P<0.01）；與黃連+生地配伍組比較，黃連組、生地組葡萄糖消耗量低于配伍組（P<0.01，P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　第二部分 黃連、生地及其配伍對(duì)IR3T3-L1脂肪細(xì)胞IRS-PI3K信號(hào)通路相關(guān)分子IRS-1tyr608、IRS-1ser307、Aktser473磷酸化水平的影響與正常組比較，模型組IRS-1tyr608、Aktser473磷酸化水平顯著下降（P<0.01），IRS-1

6、ser307磷酸化水平顯著增加（P<0.01）；與模型組比較，黃連組IRS-1tyr608、IRS-1ser307磷酸化水平無(wú)顯著性差異（P>0.05），生地組IRS-1ser307磷酸化水平顯著降低（P<0.01），IRS-1tyr608磷酸化水平無(wú)顯著性差異（P>0.05），黃連﹢生地配伍組IRS-1tyr608磷酸化水平增加，IRS-1ser307磷酸化水平顯著降低（P<0.01），黃連組、生地組、黃連﹢生地組Aktser473磷

7、酸化水平均顯著增加（P<0.05）；與黃連﹢生地配伍組比較，黃連組IRS-1tyr608、Aktser473磷酸化水平低于配伍組（P<0.05），生地組IRS-1tyr608磷酸化水平低于配伍組（P<0.05）。
　　第三部分 黃連、生地及其配伍對(duì)IR3T3-L1脂肪細(xì)胞CAP-Cbl信號(hào)通路相關(guān)分子c-Cbltyr700、Glut4、CAP mRNA及蛋白表達(dá)水平的影響與正常組比較，模型組c-Cbltyr700磷酸化水平、Glu

8、t4、CAP mRNA和蛋白表達(dá)水平均明顯下降（P<0.01）；與模型組比較，黃連組、生地組CAP蛋白表達(dá)水平增加（P<0.05），黃連組、生地組CAPmRNA水平顯著增加（P<0.01），黃連+生地組CAP mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著增加（P<0.01）,生地組、黃連+生地配伍組Glut4、c-Cbltyr700磷酸化水平增加（P<0.05），黃連組Glut4、c-Cbltyr700磷酸化水平無(wú)顯著性差異（P>0.05）；與黃連+生地

9、配伍組比較，黃連組CAP、Glut4、c-Cbltyr700磷酸化水平低于配伍組（P<0.01），生地組Glut4、CAP mRNA和蛋白表達(dá)水平低于配伍組（P<0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.黃連、生地及其配伍可以改善高糖聯(lián)合高胰島素所誘導(dǎo)的IR，且黃連生地配伍的作用優(yōu)于單味藥。
　　2.黃連可通過(guò)增加CAP的表達(dá)、Aktser473磷酸化水平，以改善高糖聯(lián)合高胰島素誘導(dǎo)的IR；生地可通過(guò)降低IRS-1ser307

10、磷酸化水平，增加CAP、Glut4的表達(dá)，c-Cbltyr700、Aktser473磷酸化水平，以改善IR；黃連生地配伍可通過(guò)降低IRS-1ser307磷酸化水平，增加IRS-1tyr608、Aktser473、c-Cbltyr700磷酸化水平，CAP、Glut4的表達(dá)，改善高糖聯(lián)合高胰島素誘導(dǎo)的IR。
　　3.黃連生地配伍增加CAP、Glut4表達(dá)及IRS-1tyr608磷酸化水平的作用優(yōu)于黃連、生地單味藥，提示黃連、生地在上述