1、目的：本研究是根據(jù)我省歷年來上報的乙型腦炎資料分析我省乙型腦炎的流行趨勢，并在不同生態(tài)環(huán)境中捕捉蚊蟲標本，找出我省不同生態(tài)環(huán)境中的優(yōu)勢蚊種，同時用細胞培養(yǎng)的方法從蚊體內分離病毒，并用常規(guī)PCR和熒光PCR的方法進行初步鑒定，篩選乙型腦炎病毒，為以后對病毒進行核苷酸序列分析、鑒定病毒種類、研究我省存在的乙腦病毒與國內、外其他地域同種病毒的差異，繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，進而研究病毒的進化規(guī)律和分析目前使用的疫苗有無保護作用打下基礎。 方法：

2、 1.資料收集：根據(jù)歷年來我省上報的乙型腦炎資料進行統(tǒng)計，參考我省已發(fā)表的有關此課題的文獻，進行分析乙腦流行趨勢及其原因。 2.標本的收集運輸：在不同生態(tài)環(huán)境中將捕到蚊子，快速凍死后剔除雄蚊，將蚊子分類，50～100只為一組，裝入凍存管中，用醫(yī)用膠布封口，并用記號筆編號，凍存管放入布袋中后及時放入液氮中，送至實驗室。 3.根據(jù)在我省不同生態(tài)環(huán)境中采集蚊蟲標本結果，分析我省不同生態(tài)環(huán)境中蚊種的構成，找出優(yōu)勢蚊種。

3、 4.利用BHK和Vero細胞培養(yǎng)的方法對蚊子攜帶的病毒進行分離。 5.用TRIZOLLSReagent提取分離到病毒的RNA，再用常規(guī)PCR和熒光PCR方法進行初步鑒定。 結果： 1.河南省乙型腦炎發(fā)病情況同我國總的情況基本一致。自20世紀70年代后期大規(guī)模使用乙腦疫苗后，除1990與1991年有個小發(fā)病高峰外，乙腦發(fā)病率在顯著下降，2004年發(fā)病率達到了0.39/10萬；發(fā)病具有明顯的季節(jié)性，85％以上

4、病例發(fā)生集中在7、8、9三個月，這與我省蚊蟲出現(xiàn)隨季節(jié)性變化而變化的特點相一致；病例主要分布于氣溫相對較高、雨量相對偏多的豫南、豫東南的信陽、駐馬店、南陽市、周口市以及商丘的部分地區(qū)，平頂山、洛陽、偶有集中發(fā)病，黃河以北地區(qū)發(fā)病相對減少。年齡分布主要集中于10歲以下兒童，占80％以上，5歲以下病例約占50％，男女性別比為1.4∶1。 2.本次實驗在我省不同生態(tài)環(huán)境中共捕獲蚊蟲25787只，其中庫蚊18999只，按蚊2715只，伊

5、蚊85只，阿蚊3878只。庫蚊占全部蚊蟲的73.7％，按蚊占10.5％，伊蚊0.3％，阿蚊占15％，可見庫蚊為我省優(yōu)勢蚊種。山區(qū)、平原和濕地均以庫蚊為主，山區(qū)及濕地未能捉到伊蚊；而丘陵地區(qū)按蚊和阿蚊為優(yōu)勢蚊種，庫蚊和伊蚊較少；在黃河濕地阿蚊也占一定比例。 3.隨機將每個生態(tài)環(huán)境中所捕蚊子取出10管，組成一個組，研磨接種細胞，進行病毒分離。共分離到8株可疑病毒，均能引起B(yǎng)HK細胞和Vero細胞穩(wěn)定病變。BHK細胞病變以圓縮和脫落為

6、主，而Vero細胞病變以聚集、拉網(wǎng)、圓縮為主。出現(xiàn)病變時一般在48～72小時之間，均具有濾過性(0.22μm濾過膜)，其中4株病毒帶回北京進行鑒定，其余4株病毒經(jīng)常規(guī)PCR及熒光PCR鑒定發(fā)現(xiàn)有一株為乙型腦炎病毒。 結論： 河南省于1953年從病人的腦組織中分離到了乙腦病毒，1991年在河南省新安縣采集了淡色庫蚊300只、阿蚊450和三帶喙庫蚊30只，利用細胞和乳鼠對全部標本進行了病毒分離，結果從淡色庫蚊中分離出1株病毒