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1、目的:檢測(cè)LY294002作用于人源胃癌細(xì)胞株SGC7901后對(duì)細(xì)胞增殖凋亡及相關(guān)調(diào)控因子的影響,研究阻斷P13K/Akt信號(hào)通路對(duì)胃癌的作用及機(jī)制。
方法:采用MTT法檢測(cè)LY294002對(duì)SGC7901細(xì)胞的增殖抑制率;倒置顯微鏡觀察SGC7901的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;采用AnnexinV/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)分析SGC7901細(xì)胞凋亡細(xì)胞比例;RT-PCR檢測(cè) NAG-1、Skp2 mRNA的表達(dá)情況,western bl
2、ot檢測(cè)磷酸化Akt(p-Akt)和總Akt(t-Akt)的表達(dá)情況。
結(jié)果:LY294002可明顯抑制SGC7901的生長(zhǎng),呈時(shí)間-劑量依賴性,50μmol/L的LY294002作用24h的增殖抑制率可達(dá)75%;SGC7901細(xì)胞在LY294002作用后出現(xiàn)典型的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變,部分細(xì)胞變圓漂浮,部分細(xì)胞固縮、分解,并出現(xiàn)細(xì)胞碎片;經(jīng)10、30、50μmol/L的LY294002作用12小時(shí)后的凋亡率依次為(12.74±
3、0.42)%,(36.5士0.45)%、(64.1士0.79)%,明顯高于空白對(duì)照組的(2.3士0.36)%(P<0.01);LY294002可下調(diào)p-Akt的蛋白表達(dá)(P<0.05),而t-Akt未受影響;LY294002可上調(diào)NAG-1 mRNA表達(dá),下調(diào)Skp2 mRNA表達(dá),差異具有顯著性(P<0.05)。
結(jié)論:LY294002能明顯抑制胃癌細(xì)胞SGC7901的增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,其機(jī)制可能與其抑制Akt磷酸化阻
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