1、研究目的： 云南燈盞花素是從天然植物燈盞花中提取的黃酮類有效成分，臨床主要用于心腦血管疾病。近幾年在糖尿病視網(wǎng)膜病中的應(yīng)用也受到廣泛關(guān)注，而臨床應(yīng)用中不良反應(yīng)時(shí)常發(fā)生，由于病變復(fù)雜和其作用的多靶點(diǎn)，作用機(jī)制目前還不明確，由此引發(fā)的藥物糾紛也成為法醫(yī)工作者的難題。 本研究以高糖、低氧及高糖低氧聯(lián)合模擬糖尿病視網(wǎng)膜病變內(nèi)環(huán)境，觀察燈盞花素在此環(huán)境中對(duì)體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞(human retinal endotheli

2、al cells，HREC)的影響及對(duì)VEGF的作用，并進(jìn)一步探討燈盞花素可能的作用機(jī)制。 探索燈盞花素類似化合物對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響，為涉及到此方面的法醫(yī)病理學(xué)及法醫(yī)臨床學(xué)診斷提供藥理學(xué)基礎(chǔ). 研究方法： 采用CCK-8檢測(cè)HREC在高糖，低氧，高糖低氧聯(lián)合和正常糖處理?xiàng)l件下的增殖情況及燈盞花素對(duì)HREC增殖作用的影響，甘露醇作為滲透壓對(duì)照，氯化鈷(150umol/L)模擬低氧條件；免疫印記(Weste

3、rn blot)檢測(cè)不同處理?xiàng)l件下VEGF蛋白的表達(dá)情況；酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè)各組培養(yǎng)液上清中VEGF蛋白含量。研究結(jié)果： 1.中高糖和低氧可明顯促進(jìn)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖(P<0.05)，但單獨(dú)高糖(30mmol/L)條件下未見明顯的增殖。 2.高糖低氧聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖與高糖或低氧獨(dú)立因素誘導(dǎo)增殖相比，沒有顯著差異(P<0.05)。 3.高糖和低氧誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞VEG

4、F蛋白表達(dá)增加(P<0.05)。 4.不同濃度燈盞花素(1×10-11～1×10-5mol/L)處理HREC48 h，細(xì)胞存活率分別為99.38±7.85％，98.87±8.8％，99.62±5.35％，99.69±4.66％；處理72 h，細(xì)胞的存活率分別為99.02±6.44％，99.16±6.15％，97.57±6.26％，104.00±4.29％，提示燈盞花素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響不明顯。 5.燈盞花素對(duì)中高糖，低

5、氧誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用(P<0.05)，但濃度依賴作用不明顯。 6.在高糖和低氧條件下，燈盞花素對(duì)人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF的表達(dá)有顯著的抑制作用(P<0.05)。 研究結(jié)論： 1.中高糖和低氧刺激是視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的有效因素，高糖和低氧聯(lián)合培養(yǎng)，對(duì)細(xì)胞增殖沒有疊加效應(yīng)。 2.燈盞花素(1×10-11～1×10-5mol/L)對(duì)正常糖培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞活性沒有影響。 3.