1、目的:ω-3多不飽和脂肪酸(ω-3 polyunsaturated fatty acids,ω-3PUFAs)是營(yíng)養(yǎng)免疫中小分子物質(zhì)的重要組成部分,其主要成分包括二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)。樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)具有激活免疫排斥和誘導(dǎo)免疫耐受的雙重潛力,兩者此消彼長(zhǎng)。經(jīng)DCs誘導(dǎo)耐受是延長(zhǎng)移植物存活的有效方法。本研究通過人外周血單個(gè)核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞的體外培養(yǎng),對(duì)DCs進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀

2、察、細(xì)胞因子及免疫表型的檢測(cè),探討ω-3多不飽和脂肪酸對(duì)樹突狀細(xì)胞成熟狀態(tài)及免疫學(xué)功能的影響。
　　 方法:取新鮮健康成人外周血,經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液梯度分離,取中間白膜層細(xì)胞,通過貼壁處理,獲得單個(gè)核細(xì)胞,加入含10％胎牛血清的RPMI1640完全培養(yǎng)基、人重組集落刺激因子(rhGM-CSF)、人重組白細(xì)胞介素-4(rhIL-4),使其終濃度為:rhGM-CSF500U/ml,rhIL-4250U/ml,隔日半量換液,誘導(dǎo)5天,獲

3、得未成熟樹突狀細(xì)胞(immature DC,imDC),然后以ω-3多不飽和脂肪酸二十碳五烯酸(EPA),二十二碳六烯酸(DHA)或飽和脂肪酸硬脂酸(SA)處理細(xì)胞24h,并將其分為5組:未成熟DCs組、成熟DCs組、EPA處理組、DHA處理組和SA處理組。內(nèi)毒素脂多糖(LPS)誘導(dǎo)細(xì)胞成熟后,細(xì)胞爬片Wright-Giemsa染色觀察各組樹突狀細(xì)胞形態(tài)；采用半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)樹突狀細(xì)胞共刺激分子CD80 m

4、RNA、CD86 mRNA及表面抗原提呈分子人類白細(xì)胞抗原-DR(HLA-DR)mRNA的表達(dá)；采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)各組細(xì)胞上清中白細(xì)胞介素-12(IL-12)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的含量。結(jié)果:未成熟DCs組CD80 mRNA、CD86 mRNA及HLA-DR mRNA的相對(duì)表達(dá)量為0.369±0.023、0.573±0.033及0.467±0.020,成熟DCs組這3種分子高表達(dá),其相對(duì)表達(dá)量為0.76

5、7±0.017、1.160±0.047及0.801±0.016,成熟DCs組與未成熟DCs組之間相比,有顯著性差異(P<0.01)；EPA處理組CD80mRNA、CD86mRNA及HLA-DRmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.547±0.034、0.849±0.043及0.6574±0.023,DHA處理組CD80mRNA、CD86mRNA及HLA-DRmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.465±0.032、0.875±0.042及0.619±0

6、.019,EPA和DHA處理組與成熟DCs組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而SA處理組CD80mRNA、CD86mRNA及HLA-DRmRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.757±0.020、1.132±0.064及0.792±0.018,與成熟組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。細(xì)胞上清IL-12的含量,5個(gè)組分別為190.73±16.26、768.05±62.73、358.71±52.79、412.63±62.64、709.48±4

7、7.81 pg/ml,細(xì)胞上清TNF-α的含量,5個(gè)組分別為637.61±38.40、2405.73±125.48、1605.64±138.39、1807.38±140.34、2353.34±194.74 pg/ml,EPA及DHA處理組與成熟DCs組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而SA組與成熟DCs組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論:ω-3多不飽和脂肪酸可以在體外下調(diào)樹突狀細(xì)胞共刺激分子CD80、CD