1、月經(jīng)是自然界中人和部分靈長(zhǎng)類動(dòng)物以及少數(shù)其它動(dòng)物(如蝙蝠、大象)所獨(dú)有的一種生理現(xiàn)象,是子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)、血管增生、腺體生長(zhǎng)分泌以及子宮內(nèi)膜崩解脫落并伴隨出血的生理性周期變化。這種周期性變化正是女性生殖系統(tǒng)的生理特點(diǎn)之一,自上世紀(jì)80年代以來,包括我們實(shí)驗(yàn)室在內(nèi)的國(guó)內(nèi)外的研究者們通過人工給予激素或借助假孕動(dòng)物模型的方式建立了小鼠月經(jīng)模型,但小鼠并非行經(jīng)動(dòng)物,因此通過人工外在刺激模擬產(chǎn)生的小鼠月經(jīng)模型并不能夠真正反應(yīng)人類月經(jīng)發(fā)生和發(fā)展的過程,

2、該模型的運(yùn)用具有一定的局限性。因此,建立一個(gè)人源化的月經(jīng)發(fā)生模型來研究月經(jīng)發(fā)生的細(xì)胞和分子生物學(xué)基礎(chǔ)具有十分重要的意義。在此月經(jīng)模型基礎(chǔ)之上,探討月經(jīng)出血以及環(huán)氧合酶在月經(jīng)蛻膜化中的作用,本研究的主要內(nèi)容分為如下三個(gè)部分。
　　 我們首先建立人子宮內(nèi)膜組織異體移植模型。將人子宮內(nèi)膜組織異種移植到SCID小鼠皮下后,人工給予雌、孕激素。觀察移植后不同時(shí)間點(diǎn),移植組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)變化,激素水平,波形蛋白和角蛋白標(biāo)志物表達(dá)情況,并與在

3、體周期性變化的子宮內(nèi)膜組織比較。研究表明,組織移植后同樣發(fā)生與在體人子宮內(nèi)膜相似增殖、分化和崩解的組織形態(tài)學(xué)變化。對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶1、2和9的表達(dá),蛻膜化標(biāo)志物催乳素以及環(huán)氧合酶1和2的表達(dá)進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示,上述過程與在體人子宮內(nèi)膜組織和靈長(zhǎng)類月經(jīng)研究所揭示的特征相符合。另外,在白細(xì)胞浸潤(rùn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同類型白細(xì)胞參與月經(jīng)周期不同階段,發(fā)揮不同的生物學(xué)作用。移植子宮內(nèi)膜組織與小鼠組織形成血管嵌合體。
　　 在前期結(jié)果的啟發(fā)下,

4、我們進(jìn)一步深入探索了環(huán)氧合酶在子宮內(nèi)膜蛻膜化過程中的作用。在人子宮內(nèi)膜組織異體移植模型基礎(chǔ)上,一方面在代謝水平層面,給予宿主小鼠環(huán)氧合酶抑制劑吲哚美辛和塞來昔布,觀察蛻膜化發(fā)生程度。結(jié)果顯示,COX2對(duì)于蛻膜化的啟動(dòng)是必須的,而對(duì)于蛻膜化的維持不是必須的,環(huán)氧合酶抑制劑抑制蛻膜化發(fā)生具有時(shí)間特異性。吲哚美辛同時(shí)抑制PGE2和PGF2α的合成,由于COX1代償作用,塞來昔布對(duì)PGE2和PGF2α的合成未見影響。另一方面,我們進(jìn)行了分子水平

5、的前期研究工作,主要是建立人子宮內(nèi)膜組織塊體外慢病毒轉(zhuǎn)染體系,通過對(duì)組織培養(yǎng)條件、轉(zhuǎn)染條件、病毒數(shù)量等方面進(jìn)行優(yōu)化,達(dá)到了50％的轉(zhuǎn)染陽性率,為下一步進(jìn)行RNA干擾下調(diào)環(huán)氧合酶基因、以及子宮月經(jīng)發(fā)生的分子機(jī)制研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和提供技術(shù)保障。
　　 在改良子宮內(nèi)膜細(xì)胞原代分離培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)之上,我們將人端粒酶基因通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法導(dǎo)入體外培養(yǎng)的人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞,以建立永生化人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞系。結(jié)果表明,原代分離得到的子宮內(nèi)膜

6、基質(zhì)和上皮細(xì)胞分別達(dá)到97％和90％的純度。RT-PCR檢測(cè)顯示,通過脂質(zhì)體傳染的方式,成功地將人端粒酶基因?qū)爰?xì)胞,并穩(wěn)定表達(dá)。經(jīng)過G418篩選,得到2個(gè)單克隆,并擴(kuò)大傳代培養(yǎng),目前傳至第10代和15代。
　　 綜上所述,我們成功的建立了人子宮內(nèi)膜異種移植月經(jīng)模型,并初步表明在這個(gè)過程中,環(huán)氧合酶在月經(jīng)蛻膜化啟動(dòng)過程中發(fā)揮著重要的作用,為進(jìn)一步的完善分子生物學(xué)研究模型,我們進(jìn)行了建立人子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞系和體外組織塊慢