1、該研究旨在系統(tǒng)研究生后不同發(fā)育階段的嚙齒類動(dòng)物睪丸和附睪GCNF表達(dá)的時(shí)空規(guī)律及其雄激素調(diào)控,為進(jìn)一步研究GCNF與精子發(fā)生和精子成熟的關(guān)系提供研究基礎(chǔ).該研究分兩個(gè)部分:第一部分:生殖細(xì)胞核因子(GCNF)在睪丸和附睪生后發(fā)育中的表達(dá);目的和方法:采用半定量RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR以及間接免疫熒光等方法,從mRNA和蛋白水平分別檢測(cè)GCNF基因在小鼠、大鼠睪丸和附睪中的表達(dá)及其生后發(fā)育中的變化規(guī)律.鑒于GCNF在嚙齒類動(dòng)

2、物睪丸與附睪的生后發(fā)育過程中有規(guī)律的時(shí)空表達(dá)方式提示GCNF可能在精子發(fā)生的啟動(dòng)、精子核蛋白轉(zhuǎn)型、精子成熟以及附睪上皮的發(fā)育和分化中起重要作用.第二部分:雄激素對(duì)生殖細(xì)胞核因子(GCNF)在附睪上皮中表達(dá)的調(diào)控;目的和方法:①建立一個(gè)簡便而有效的大、小鼠附睪上皮體外培養(yǎng)系統(tǒng).②采用RT-PCR及間接免疫熒光等方法,從mRNA和蛋白水平分別檢測(cè)GCNF基因在小鼠、大鼠培養(yǎng)附睪上皮中的表達(dá)及其雄激素調(diào)控.③通過去勢(shì)手術(shù)以及去勢(shì)后補(bǔ)充雄激素等

3、手段,進(jìn)一步研究在體情況下雄激素對(duì)附睪上皮GCNF表達(dá)的調(diào)控以及雄激素調(diào)控的區(qū)域性.結(jié)論:GCNF蛋白和mRNA在附睪頭部、體部、尾部原代培養(yǎng)上皮中均有表達(dá)且表達(dá)較穩(wěn)定,其表達(dá)有明顯區(qū)域性.雄激素對(duì)體外和體內(nèi)附睪上皮GCNF蛋白和mRNA的表達(dá)均有下調(diào)作用,且雄激素的調(diào)控作用有明顯的區(qū)域特異性.總之,該研究是對(duì)嚙齒類動(dòng)物睪丸與附睪生后發(fā)育過程中GCNF表達(dá)時(shí)空規(guī)律的系統(tǒng)觀察,主要的創(chuàng)新點(diǎn)有:(1)首次觀察到GCNF在小鼠睪丸生后發(fā)育的第

4、17天其細(xì)胞定位發(fā)生了關(guān)鍵性的轉(zhuǎn)變,即從原先定位于精原細(xì)胞和早期精母細(xì)胞轉(zhuǎn)而定位于圓形精子細(xì)胞和部分粗線期精母細(xì)胞,提示GCNF在精子發(fā)生的啟動(dòng)中可能起到一個(gè)"開關(guān)"樣作用.(2)首次系統(tǒng)觀察了嚙齒類動(dòng)物附睪生后發(fā)育中GCNF表達(dá)的時(shí)空規(guī)律以及區(qū)域特異性,提示GCNF可能在附睪上皮的發(fā)育分化和附睪精子成熟中起重要作用.(3)用在體和離體兩種實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)一步證實(shí)雄激素對(duì)附睪上皮GCNF蛋白和mRNA的表達(dá)均有下調(diào)作用,且雄激素的調(diào)控作用有明